本文選題：大腸埃希菌 + AcrAB-TolC外排泵��； 參考：《西南大學(xué)》2015年碩士論文

【摘要】：抗菌藥物的廣泛不合理使用,細(xì)菌的耐藥性亦日趨嚴(yán)重,超級(jí)細(xì)菌已在世界各地均有發(fā)現(xiàn)。為避免細(xì)菌感染,人們往往會(huì)采取使用各類消毒劑的方式來對(duì)環(huán)境加以消毒,以減少感染病原菌的機(jī)會(huì),然而,隨著消毒劑的廣泛不合理使用,細(xì)菌對(duì)消毒劑也同樣產(chǎn)生了耐藥性,本教研室前期研究表明細(xì)菌對(duì)消毒劑和抗菌藥物的耐藥具有交叉性,即對(duì)抗菌藥物耐藥的細(xì)菌對(duì)消毒劑有一定耐受性,反之,對(duì)消毒劑耐藥的細(xì)菌對(duì)抗菌藥物亦具有耐藥性。但當(dāng)前關(guān)于細(xì)菌對(duì)消毒劑與抗菌藥物間交叉耐藥的機(jī)制未有確切報(bào)道,為探究交叉耐藥機(jī)制開展了本課題的研究,旨在為臨床合理使用抗菌藥物和消毒劑提供理論依據(jù)。1、體外誘導(dǎo)大腸埃希菌ATCC25922獲得多重耐藥菌株基于前期研究選擇了可誘導(dǎo)大腸埃希菌產(chǎn)生耐藥的消毒劑苯扎溴銨及在臨床使用中易導(dǎo)致細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性的土霉素為試驗(yàn)藥物,采用微量肉湯稀釋法測定土霉素及苯扎溴銨對(duì)大腸埃希菌質(zhì)控菌ATCC25922的MIC。采用多步法分別以亞抑菌濃度(1/2MIC)的土霉素和苯扎溴銨為起點(diǎn)對(duì)質(zhì)控菌ATCC25922進(jìn)行體外誘導(dǎo),并檢測誘導(dǎo)前后土霉素和苯扎溴銨對(duì)受試菌株的最小抑菌濃度(MIC)變化情況。結(jié)果：通過體外誘導(dǎo)獲得了對(duì)土霉素和苯扎溴銨均耐藥的菌株A (Oxy)和A (Ben):土霉素對(duì)A (Ben)的MIC是誘導(dǎo)前的250倍,對(duì)A (Oxy)的MIC是誘導(dǎo)前的320倍,苯扎溴銨對(duì)A (Oxy)和A (Ben)的MIC均是誘導(dǎo)前的18倍。結(jié)論：土霉素和苯扎溴銨分別誘導(dǎo)大腸埃希菌后可獲得對(duì)消毒劑苯扎溴銨和土霉素均耐藥的菌株。2、AcrAB-TolC在交叉耐藥菌株中的作用研究檢測誘導(dǎo)所得耐藥菌株A (Oxy)和A (Ben)的外排泵基因acrA/B、tolC及其調(diào)控基因mar A、soxS、rob較誘導(dǎo)前的變異情況；測定A (Oxy)和A (Ben)的marA、sxS、rob、acrA、acrB、tolC mRNA表達(dá)量較誘導(dǎo)前的變化情況。并將A (Oxy)和A (Ben)制備成感受態(tài)細(xì)胞,設(shè)計(jì)針對(duì)mar A的siRNA,測定在分別含有不同濃度的土霉素和苯扎溴銨的培養(yǎng)基中加入siRNA后對(duì)大腸埃希菌生長的影響。將marA基因連入質(zhì)粒構(gòu)建可過量表達(dá)marA的大腸埃希菌,測定土霉素、苯扎溴銨對(duì)該菌株的MIC,從正向進(jìn)一步研究marA表達(dá)量變化對(duì)大腸埃希菌對(duì)藥物敏感性的影響,進(jìn)而闡釋AcrAB-TolC在大腸埃希菌對(duì)土霉素和苯扎溴銨交叉耐藥中的作用。結(jié)果：A (Oxy)和A (Ben)的marA、soxS、rob、 acrA、acrB、tolC的基因序列和氨基酸序列與質(zhì)控菌相應(yīng)序列相比均有不同程度的突變,且A (Oxy)和A (Ben)所有基因堿基序列都有相同位點(diǎn)發(fā)生突變,除rob和acrA外其余基因的氨基酸序列也有在相同位點(diǎn)發(fā)生突變。A (Oxy)和A (Ben)的marA、acrA、 acrB、tolC表達(dá)量均顯著或極顯著增加,soxS、rob極顯著減少。RNA干擾試驗(yàn)中,含有1/2MIC土霉素的各試驗(yàn)組菌液的OD595值在第2小時(shí)到第8小時(shí)時(shí)段內(nèi)顯著或極顯著低于陰性對(duì)照組；加入低于MIC濃度的土霉素或苯扎溴銨的各試驗(yàn)組與對(duì)照組相比差異均不顯著；含有大于或等于MIC濃度土霉素或苯扎溴銨的各試驗(yàn)組細(xì)菌未生長。成功構(gòu)建了可過量表達(dá)marA的大腸埃希菌,且土霉素、苯扎溴銨對(duì)構(gòu)建的可過量表達(dá)marA的大腸埃希菌Arctic Express-MarA的MIC值分別是原核宿主菌Arctic Express的64倍和4倍。結(jié)論：誘導(dǎo)所得耐藥菌株A (Oxy)和A (Ben)外排泵基因acrA/B、tolC及其調(diào)控基因marA、soxS、rob的基因突變及表達(dá)量變化可能對(duì)AcrAB-TolC的表達(dá)量有影響,也表明大腸埃希菌對(duì)土霉素和苯扎溴銨的交叉耐藥與外排泵AcrAB-TolC有關(guān),且marA基因?qū)crA/B、tolC的正向調(diào)控作用是土霉素與苯扎溴銨之間交叉耐藥的重要作用機(jī)制。從以上試驗(yàn)結(jié)果可以說明,常見抗菌藥物與消毒劑之間存在交叉耐藥性,其交叉耐藥機(jī)制與外排泵耐藥機(jī)制具有高度相關(guān)性,提示人類日常生活及畜牧業(yè)生產(chǎn)中應(yīng)防范濫用該兩類藥物所帶來的風(fēng)險(xiǎn)。屬性不符
[Abstract]:In order to avoid the infection of bacteria , it was found that the resistance of bacteria to disinfectant and antibacterial drugs was 250 times .
The effects of different concentrations of marA , sxS , rob , acrA , acrB and tolC on the growth of Escherichia coli were studied .
Compared with the control group , there was no significant difference between the test group and the control group , which was lower than MIC concentration .
Conclusion : The gene acrA / B , tolC and its regulatory genes , such as acrA / B , tolC and its regulatory genes , such as marA , soxS and rob , have a high correlation to the expression of acrA / B and tolC .

【學(xué)位授予單位】：西南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S852.61

【引證文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1862511