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基因Ⅰ型乙腦病毒EDⅢ結構域蛋白的原核表達及其抗體制備與鑒定

發(fā)布時間:2018-05-07 10:34

  本文選題:乙腦病毒 + EDⅢ結構域 ; 參考:《中國獸醫(yī)科學》2017年12期


【摘要】:為了分析和驗證作為乙腦病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)亞單位疫苗研制的主要候選抗原EDⅢ結構域的免疫原性及其所產(chǎn)生的抗體對病毒的抑制效果,本研究利用RT-PCR方法擴增基因Ⅰ型JEV GS株EDⅢ結構域基因,構建原核重組表達載體p ET-30a-EDⅢ,轉化大腸桿菌BL21感受態(tài)細胞,挑取陽性克隆進行誘導表達和純化;將純化的EDⅢ重組蛋白免疫家兔以制備多克隆抗體,利用Western-blot和間接免疫熒光試驗驗證制備的家兔抗EDⅢ多克隆抗體與全病毒抗原的特異性反應,并通過噬斑減少中和試驗(PRNT50)測定家兔抗EDⅢ多克隆抗體的中和抗體效價。結果表明,重組EDⅢ蛋白以包涵體的形式表達,并獲得了較高純度的EDⅢ重組蛋白,制備的家兔抗EDⅢ多克隆抗體與全病毒抗原具有良好的特異性反應,中和抗體效價為133±46.2。以上結果表明,基因Ⅰ型JEV GS株EDⅢ結構域具有良好的免疫原性,免疫動物所產(chǎn)生的抗體具有較高的中和抗體效價,EDⅢ結構域可作為JEV亞單位疫苗研制的候選抗原。
[Abstract]:In order to analyze and verify the immunogenicity of the main candidate antigen Ed 鈪,

本文編號:1856582

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