本文選題：IBRV + gB基因��； 參考：《畜牧獸醫(yī)學(xué)報》2006年12期

【摘要】：經(jīng)DNAstar分析,據(jù)牛傳染性鼻氣管炎病毒(IBRV)全基因序列設(shè)計合成gB基因的特異性引物,以構(gòu)建的pGM-T-gB為模板,PCR擴增IBRV gB蛋白192-266位氨基酸的基因序列。將目的片段克隆,酶切鑒定并測序鑒定后,定向插入pET32a表達載體中,轉(zhuǎn)化表達菌BL21。SDS-PAGE電泳分析表明,誘導(dǎo)表達產(chǎn)物以包涵體和可溶形式存在,大小約為29.2 ku,與預(yù)測值相符。親和純化后重組蛋白濃度為2.000 mg/mL,純度為79.2%。間接ELISA檢測證明,表達蛋白具有抗原性。以該蛋白作為診斷抗原,建立了間接ELISA診斷方法。確定的抗原包被濃度為50μg/mL,血清的最佳稀釋度為1∶40,陽性標準定為S/P0.395。交叉試驗表明對牛流熱(BEV)、牛肺疫(CBPP)、牛病毒性腹瀉(BVD)、牛結(jié)核(BTB)、牛副結(jié)核(PBB)以及牛赤羽病(BAD)等其它6種疾病陽性血清不發(fā)生交叉反應(yīng)。與中和試驗相比較,特異性、敏感性和符合率分別為83.3%、90.9%和88.9%;與進口法國IBRV全病毒ELISA抗體診斷試劑盒比較,特異性、敏感性和符合率分別為92%、92.7%和92.5%。上述結(jié)果表明該診斷方法具有良好的特異性和敏感性,顯示了良好的應(yīng)用前景。
[Abstract]:The recombinant protein was cloned , identified and sequenced . The results showed that the specific sensitivity and the coincidence rate were 83 . 3 % , 90 . 9 % and 92 . 5 % respectively .

【作者單位】： 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所
【基金】：“863”計劃(2003AA41110) 黑龍江省重大攻關(guān)項目(GA02B501)
【分類號】：S854.4;S852.65

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本文編號：1815472