發(fā)布時間：2018-04-15 15:14

  本文選題：旋毛蟲肌幼蟲 + 谷氨酰胺酶��； 參考：《中國獸醫(yī)科學(xué)》2017年05期

【摘要】：采用RT-PCR方法從旋毛蟲肌幼蟲中擴(kuò)增出谷氨酰胺酶(TsGls)基因全長序列,將其克隆到表達(dá)載體pET-32a(+)中,測序驗證后轉(zhuǎn)化到表達(dá)宿主菌Rosetta(DE3)pLysS中,用IPTG誘導(dǎo)表達(dá)重組蛋白TsGls。以純化的TsGls蛋白免疫家兔制備多克隆抗體,并對旋毛蟲肌幼蟲中的TsGls進(jìn)行免疫熒光定位。結(jié)果顯示,成功構(gòu)建了重組質(zhì)粒pET-32a(+)-TsGls;經(jīng)SDS-PAGE分析,重組TsGls蛋白的分子質(zhì)量約為72 ku;制備的多克隆抗體效價可達(dá)1.024×10~6;Western-blot分析結(jié)果顯示,多克隆抗體與重組TsGls具有較強(qiáng)反應(yīng)性;免疫熒光定位顯示,TsGls蛋白存在于旋毛蟲肌幼蟲皮下組織。上述研究結(jié)果為進(jìn)一步研究旋毛蟲谷氨酸依賴型抗酸機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:The full-length Glutamase TsGls gene was amplified from the muscle larvae of Trichinella spiralis by RT-PCR and cloned into the expression vector pET-32a (). After sequencing, it was transformed into the host strain Rosetta(DE3)pLysS, and the recombinant protein TsGls was induced by IPTG.The polyclonal antibody was prepared by immunizing rabbits with purified TsGls protein and the TsGls in muscle larvae of Trichinella spiralis was detected by immunofluorescence.The results showed that the recombinant plasmid pET-32a (pET-32a) was successfully constructed, the molecular weight of the recombinant TsGls protein was about 72kuby SDS-PAGE analysis, and the titer of the polyclonal antibody was 1.024 脳 10 ~ (6) 渭 m Western-blot. The results showed that the polyclonal antibody was highly reactive to the recombinant TsGls.Immunofluorescence localization showed that TsGls protein existed in the subcutaneous tissue of Trichinella spiralis muscle larvae.The results laid a foundation for further study on glutamate-dependent acid-tolerant mechanism of Trichinella spiralis.
【作者單位】： 東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)學(xué)院;中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所家畜疫病病原生物學(xué)國家重點實驗室;
【基金】：家畜疫病病原生物學(xué)國家重點實驗室開放課題(SKLVEB2015KFKT010) 國家自然科學(xué)基金項目(31172312)
【分類號】：S852.7

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本文編號：1754647