發(fā)布時(shí)間：2018-04-12 20:37

  本文選題：豬瘟病毒 + 2.1d亞型�。� 參考：《長(zhǎng)江大學(xué)》2016年碩士論文

【摘要】：豬瘟(Classical swine fever, CSF)是由豬瘟病毒(Classical swine fever virus, CSFV)引起的一種嚴(yán)重危害養(yǎng)豬業(yè)的豬的高度接觸性傳染病,是被世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(OIE)列為必須上報(bào)的重大動(dòng)物疫病。CSFV是黃病毒科瘟病毒屬成員,病毒形態(tài)呈圓形,具有囊膜,直徑約為40-60nm,是單鏈RNA病毒,病毒核酸全長(zhǎng)約為12300個(gè)核苷酸,包含一個(gè)大的開(kāi)放閱讀框,編碼3898個(gè)氨基酸的前體蛋白。該前體蛋白在合成過(guò)程中被病毒自身編碼修飾,最終水解為4種結(jié)構(gòu)蛋白和8種非結(jié)構(gòu)蛋白,病毒蛋白的排列順序(從N到C終端)：Npr、C、 Ems E1、E2、P7、NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B,其中C、Ems、E1E2為結(jié)構(gòu)蛋白,其他均為非結(jié)構(gòu)蛋白。豬是CSFV唯一的易感動(dòng)物,同時(shí)也是病毒的傳播宿主,各年齡段的豬都可以感染。在所有的豬病當(dāng)中,豬瘟是危害養(yǎng)豬業(yè)最嚴(yán)重的傳染病之一,曾對(duì)我國(guó)的養(yǎng)豬業(yè)造成嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失,自從上個(gè)世紀(jì)五十年代以來(lái)我國(guó)的廣泛使用豬瘟兔化弱毒疫苗,CSF對(duì)我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)的風(fēng)險(xiǎn)已明顯降低,然而CSF在我國(guó)并沒(méi)有完全根除,還時(shí)有發(fā)生,并伴隨著時(shí)間的推移,流行株有遠(yuǎn)離疫苗株的趨勢(shì)。自2014年下半年以來(lái),我國(guó)山東省、吉林省、黑龍江省、河北省等省份的按正常免疫程序免疫過(guò)豬瘟兔化弱毒疫苗的規(guī)�；i場(chǎng)仍爆發(fā)CSFV給養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大損失。豬瘟病毒的唯一易感動(dòng)物是豬,野豬家豬均可感染,而且豬是豬瘟病毒的唯一傳播宿主,各種日齡的豬都可以感染豬瘟病毒。牛偶爾也會(huì)感染豬瘟病毒,但牛感染豬瘟病毒后不會(huì)出現(xiàn)明顯的臨床癥狀。豬瘟的爆發(fā)和流行沒(méi)有特定的季節(jié),也沒(méi)有明顯的地域特征。如果存在易感的豬,旦豬瘟病毒傳入,就會(huì)造成豬瘟的爆發(fā)和流行。發(fā)病的豬主要通過(guò)精液、尿液、糞便和鼻腔分泌物來(lái)排毒。野豬是CSFV的易感宿主之一,野豬呈全球分布,豬瘟病毒很容易在野豬群眾形成病毒的傳播鏈。CSF是嚴(yán)重危害我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)的最主要豬病之一,自上個(gè)世紀(jì)50年代,中國(guó)成功研制出兔化弱毒疫苗,該疫苗的被廣泛推廣并應(yīng)用,有效的抑制了豬瘟的規(guī)模性爆發(fā)和普遍流行。以兔化弱毒疫苗免疫為根本,我國(guó)在1956年就曾經(jīng)提出徹底消滅豬瘟的規(guī)劃,然而60多年已經(jīng)過(guò)去了,豬瘟在我國(guó)還不斷地的出現(xiàn)、散發(fā)流行,仍然制約著我國(guó)的養(yǎng)豬業(yè)健康快速的發(fā)展。當(dāng)前,豬瘟的流行具有以下的特點(diǎn)；(1)流行廣泛,豬瘟在我國(guó)各個(gè)地區(qū)均流行,涂長(zhǎng)春在全國(guó)31個(gè)省(自治區(qū)、直轄市)收集的臨床病料中,都檢測(cè)出豬瘟,根據(jù)這一檢測(cè)結(jié)果可知豬瘟在我國(guó)流行的范圍之廣。(2)豬瘟在我國(guó)的流行趨勢(shì)是散發(fā)流行,由于兔化弱毒疫苗的廣泛推廣和使用,我國(guó)各地的豬群對(duì)豬瘟病毒有一定的免疫能力,因此豬瘟在我國(guó)并沒(méi)有大規(guī)模的出現(xiàn)和盛行。豬瘟在我國(guó)在我國(guó)的流行趨勢(shì)是散發(fā)流行、強(qiáng)度不大、沒(méi)有明顯的季節(jié)性。(3)發(fā)病年齡小,中國(guó)的發(fā)病豬多為3月齡以下,尤其是斷奶前后的仔豬。成年豬的發(fā)病率較低。(4)病性復(fù)雜,豬瘟在我國(guó)已流行多年,是我國(guó)最常見(jiàn)的臨床疾病。(5)免疫力低下,盡管我國(guó)建立了系統(tǒng)的免疫機(jī)制,各部門和養(yǎng)豬業(yè)主對(duì)豬瘟的免疫預(yù)防也十分重視,然而豬瘟病毒在流行的過(guò)程中不斷的演變,兔化弱毒疫苗的免疫效果不斷降低。我國(guó)最主要流行的豬瘟病毒為2.1b亞型,然而隨著時(shí)間的推移,豬瘟病毒不斷演化,2014年在我國(guó)部分經(jīng)過(guò)嚴(yán)格免疫過(guò)的豬場(chǎng)檢測(cè)出豬瘟,經(jīng)過(guò)病毒分離、鑒定及系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)分析,結(jié)果表明我國(guó)的豬瘟流行情況發(fā)生了變化,為了進(jìn)一步了解CSFV的流行情況及分子特征,本研究分離了多株CSFV變異株,并對(duì)其E2基因序列進(jìn)行測(cè)定及分析,對(duì)部分變異株進(jìn)行全基因組序列測(cè)定及分析。(1) CSFV E2基因序列測(cè)定及分析,本研究對(duì)2014年下半年來(lái)自4個(gè)省的疑似CSF病料樣品用RT-PCR方法進(jìn)行檢測(cè),28份病料樣品中有14份樣品的檢測(cè)結(jié)果呈CSFV陽(yáng)性,將14份陽(yáng)性樣品的E2基因組序列進(jìn)行測(cè)定及分析。結(jié)果表明,14份樣品中有11株屬于2.1d新亞型毒株,這11株2.1d新亞型毒株與CSFV的代表毒株Shimen、HCLV核苷酸同源性分別為82.8～84.1%,81.1-82.4%,92.6～97.1%,氨基酸的同源性分別為89.8～91.2%,88.2-89.8%,94.1-98.9%,其余的3個(gè)毒株屬于2.1b亞型。這11株2.1d新亞型毒株在E2基因編碼的4個(gè)氨基酸(R31、S34、K303A33’)上具有一致的分子特征。(2)SDSG1410分離株和SDLS1410分離株的全基因組序列的研究,參考Genbank中登錄的Zj0801株CSFV全基因組序列,通過(guò)軟件設(shè)計(jì)并且合成出6對(duì)引物,通過(guò)RT-PCR方法,分6段擴(kuò)增覆蓋SDSG1410分離株和SDLS1410分離株的全基因組序列的片段,通過(guò)序列拼接的方法,獲得SDSG1410分離株和SDLS1410分離株的全基因組序列,拼接結(jié)果表明SDSG1410分離株和SDLS1410分離株的基因組全長(zhǎng)均為12 296 nt。全基因組遺傳進(jìn)化分析表明SDSG1410分離株和SDLS1410分離株位于同一個(gè)獨(dú)立分支中,均屬于2.1d新亞型毒株,與根據(jù)E2基因的差異進(jìn)行的基因分型的結(jié)果一致。SDSG1410分離株和SDLS1410分離株的核苷酸和推導(dǎo)氨基酸同源性的分析結(jié)果顯示,分離株的全基因組同源性與參考株相比差異較大,其中與Zj0801株的全基因組同源性最高為97.3%-97.5%,而與1.1亞型的Shimen和HCLV株的同源性僅為85.0%-85.1%及84.3%-84.4%；部分基因和非翻譯區(qū)變異較大,如Npro、C、E2、NS2、NS5A和3'UTR。對(duì)全基因組氨基酸序列分析,結(jié)果表明2.1d亞型CSFV在V640、K992、A1020、 M1090、R1395和D23746處氨基酸上具有一致的分子特征。E2全基因組序列分析表明2.1d亞型病毒株已成為我國(guó)CSFV的主要流行株。SDSG1410和PSDLS1410的全基因組序列分析也顯示同樣的結(jié)果,與我們2014年CSFV流行病學(xué)研究結(jié)果一致。本研究在全基因組水平上對(duì)我國(guó)流行CSFV的核苷酸和氨基酸進(jìn)行分析,結(jié)果表明2.1d亞型毒株已在我國(guó)廣泛流行,該亞型毒株出現(xiàn)在已經(jīng)免疫過(guò)兔化弱毒疫苗的規(guī)�；i場(chǎng),。本研究從分子水平上說(shuō)明了2.1d毒株已在我國(guó)廣泛流行,促進(jìn)了對(duì)2.1d毒株的分子特征認(rèn)識(shí),同時(shí)也為CSFV防控的策略制定、新疫苗的開(kāi)發(fā)提供了重要的科學(xué)依據(jù)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：長(zhǎng)江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S858.28

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本文編號(hào)：1741336