本文選題：狂犬病 + IgG　； 參考：《吉林大學》2015年碩士論文

【摘要】：狂犬病是由彈狀病毒科、狂犬病病毒屬的狂犬病病毒（RABV）引起的一種人獸共患病毒病，患病動物和人常出現(xiàn)嚴重的腦脊髓炎癥狀，一旦發(fā)病，死亡率接近100%。全世界每年因感染狂犬病死亡的人數(shù)約6萬人，其中絕大部分發(fā)生在非洲和亞洲。狂犬病的自然宿主范圍很廣，幾乎所有的溫血動物均可感染此病。犬是我國狂犬病毒最主要的貯藏宿主和傳播媒介，95%以上的人狂犬病是通過患病犬咬傷或者舔舐破損皮膚而引起。 世界衛(wèi)生組織（WHO）和世界動物衛(wèi)生組織（OIE）認為體內(nèi)中和抗體水平≥0.5IU/mL時，機體能抵抗該病的感染。動物免疫覆蓋率達到70%時，可有效控制狂犬病的傳播。因此在狂犬病控制過程中，通過提高犬狂犬疫苗免疫覆蓋率并結(jié)合抗體監(jiān)測，可有效防止免疫失敗及漏免現(xiàn)象，這對于控制我國狂犬病的流行傳播有著十分重要的意義。目前WHO和OIE推薦的中和抗體檢測方法分別為快速熒光灶抑制試驗（RFFIT）和熒光抗體病毒中和試驗（FAVN）。雖然這兩種方法能夠?qū)w內(nèi)中和抗體準確定量，但都需要操作強毒和細胞，還需一定的儀器設備，對血清的質(zhì)量要求也較高，且試驗周期較長，不適于大規(guī)模的樣品檢測。酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）通過酶催化底物的顏色變化來指示抗原抗體反應，不僅可以避免上述兩種方法的弊端，而且可以實現(xiàn)對樣品的大批量快速檢測。辣根過氧化物酶（HRP）因其分子量小，對化學修飾的穩(wěn)定性好等優(yōu)勢，成為ELISA中最常用的標記酶。本試驗擬通過硫酸銨沉淀和Protein A親和層析法提取犬高免血清中的抗狂犬病毒IgG抗體，并經(jīng)PAGE電泳鑒定純度后，采用過碘酸鈉氧化法標記HRP，將此酶標抗體作為競爭抗體，采用直接競爭ELISA法（c-ELISA）測定血清樣品中的抗體效價，以此來避免間接ELISA法在大規(guī)�？贵w檢測中存在的非特異性。 犬抗狂犬病病毒IgG抗體純化。本實驗中，，采用改進的硫酸銨沉淀法提取犬高免血清中抗狂犬病病毒IgG抗體，經(jīng)Protein A親和層析法精純后，用SDS-PAGE和ELISA檢測純化抗體的純度和活性。經(jīng)檢測，硫酸銨沉淀純化后的抗體回收率為96%，抗體效價約為38102，Protein A親和層析的抗體效價約為39102。 純化抗體的HRP標記及其工作濃度篩選。應用過碘酸鈉氧化法將HRP標記到純化IgG上，經(jīng)45%硫酸銨沉淀收獲酶標記抗體。經(jīng)紫外分光光度法檢測發(fā)現(xiàn)，酶標抗體中的酶結(jié)合率為39%。通過方陣法確定的ELISA最適反應條件為：最佳抗原包被濃度為50μ g/mL，酶標抗體最佳稀釋度為1:1000。應用犬易感的幾種病原包被，發(fā)現(xiàn)所制酶標抗體與它們均無交叉反應性。 ELISA檢測抗體標準曲線的建立。將標準陽性血清二倍倍比稀釋后，采用c-ELISA法測血清抗體效價和吸光度標準曲線，得到的線性回歸方程為Y=－6.387X＋5.617，決定系數(shù)為R2=0.940。確定該方法的敏感度為0.25IU/mL，檢測范圍為0.25-4IU/mL。采用該方法測定血清樣品中抗體滴度，并與FAVN法對比，發(fā)現(xiàn)兩者所得結(jié)果無顯著性差異（P=0.092，P＞0.05）。精密性檢測發(fā)現(xiàn)，平均板內(nèi)變異系數(shù)為4.76%，平均板間變異系數(shù)為5.89%。
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【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：S852.655

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 張和平;岳喜慶;馮巧萍;劉長江;孟憲文;;飽和硫酸銨法提取血清中IgG最佳條件的研究[J];中國乳品工業(yè);2006年01期

2 孟勝利;徐葛林;程滿榮;舒祥;雷勇良;朱風才;周敦金;王定明;明賀田;吳杰;嚴家新;楊曉明;;中國狂犬病病毒遺傳多樣性分析[J];中國生物制品學雜志;2010年05期

本文編號：1739258