本文選題：新型鴨細小病毒　切入點：克隆　出處：《中國動物傳染病學(xué)報》2017年02期

【摘要】：為研究新型鴨細小病毒(Novel duck parvovirus,NDPV)NS1蛋白的生物學(xué)功能,根據(jù)NDPV DS15株NS1基因(Gen Bank登錄號:KU947420)設(shè)計1對特異性引物,對NS1全基因進行PCR擴增,將PCR擴增產(chǎn)物克隆入pGEX-4T-1載體,構(gòu)建重組質(zhì)粒pGEX-4T-NS1,并進行測序鑒定。經(jīng)鑒定正確后重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到BL21感受態(tài)細胞,SDS-PAGE和Western blot進行表達鑒定。將測序獲得NS1基因編碼蛋白進行生物信息學(xué)分析。結(jié)果顯示,本研究構(gòu)建的重組質(zhì)�？稍谠思毎谐晒Ρ磉_97kDa的NS1融合蛋白。進一步生物信息學(xué)分析結(jié)果顯示,NS1蛋白為酸性、可溶性蛋白,由627個氨基酸組成,分子質(zhì)量約為72kDa。該蛋白主要位于胞漿,不含信號肽序列,無跨膜區(qū),含有絲/蘇氨酸激酶底物模序和1個潛在磷酸化位點(s546),抗原表位主要集中在多肽的C端。NS1基因的同源性及系統(tǒng)發(fā)生樹分析表明,NDPV與鵝細小病毒(Goose parvovirus,GPV)處于同一進化分支,遺傳進化關(guān)系最近。本研究結(jié)果為揭示NDPV NS1在病毒的復(fù)制、增殖以及致病機制中的作用奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:In order to study the biological function of novel duck parvovirusNDPV-NS1 protein of duck parvovirus, a pair of specific primers were designed according to the accession number of NS1 gene Genin Bank of NDPV DS15 strain: KU947420). The whole NS1 gene was amplified by PCR, and the PCR amplification product was cloned into pGEX-4T-1 vector.The recombinant plasmid pGEX-4 T-NS1 was constructed and sequenced.After identification, the recombinant plasmid was transformed into BL21 competent cells and expressed by SDS-PAGE and Western blot.The NS1 gene encoding protein was sequenced for bioinformatics analysis.The results showed that the recombinant plasmid could successfully express the NS1 fusion protein of 97kDa in prokaryotic cells.Further bioinformatics analysis showed that the NS1 protein was acidic and soluble, consisting of 627 amino acids with a molecular weight of about 72 kDa.The protein is mainly located in the cytoplasm, does not contain signal peptide sequence, and has no transmembrane region.The sequence of silk / threonine kinase substrates and a potential phosphorylation site (S546) were found. The homology of NS1 gene and phylogenetic tree analysis showed that NDPV and Goose parvovirusGPVs were in the same evolutionary branch as goose parvovirus (Goose parvovirus).Genetic and evolutionary relationships are recent.The results laid a foundation for revealing the role of NDPV NS1 in the replication, proliferation and pathogenesis of the virus.
【作者單位】： 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所;青島農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院;
【基金】：國家自然科學(xué)青年基金(31502068) 上海市科委科技創(chuàng)新醫(yī)藥與農(nóng)業(yè)領(lǐng)域項目(13391901602)
【分類號】：S852.65

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本文編號：1724654