發(fā)布時間：2018-03-31 02:16

  本文選題：ELISpot　切入點(diǎn)：口蹄疫　出處：《中國畜牧獸醫(yī)》2017年01期

【摘要】：豬口蹄疫免疫防御是控制豬口蹄疫疫情的重要手段,免疫水平指標(biāo)通常用免疫抗體水平判定。對于其細(xì)胞免疫水平檢測尚缺乏成熟可靠的技術(shù),本試驗利用市售ELISpot試劑盒建立豬口蹄疫特異γ干擾素檢測方法,刺激物分別采用疫苗全病毒顆粒(O/Mya98/XJ/2010)、口蹄疫病毒T細(xì)胞表位多肽池,以植物血凝素(PHA)為陽性對照,對細(xì)胞濃度、刺激物濃度、孵育時間等進(jìn)行優(yōu)化。優(yōu)化條件為:外周血PBMC新鮮提取或凍存細(xì)胞成活率90%以上,最佳細(xì)胞數(shù)為2×105個/孔,最佳反應(yīng)時間是16h,病毒粒子146S含量為100ng/mL,多肽最佳濃度10μg/mL,PHA的最佳濃度是20μg/mL。ELISpot技術(shù)檢測口蹄疫病毒感染豬γ干擾素方法的建立,為口蹄疫免疫力評價及口蹄疫疫苗免疫效果評估及進(jìn)一步研究其與疫苗保護(hù)力(PD50)的相關(guān)性奠定基礎(chǔ)。
[Abstract]:The immune defense against foot-and-mouth disease in pigs is an important means to control the epidemic situation of swine foot-and-mouth disease. The immune level index is usually determined by the level of immune antibody. There is a lack of mature and reliable technology for the detection of cellular immunity level of swine foot-and-mouth disease. In this study, a ELISpot kit was used to establish a specific interferon 緯 assay for porcine foot-and-mouth disease (FMD). The stimulator was treated with whole virus particle O / Mya98 / XJ / 2010, FMDV T cell epitope polypeptide pool and phytohemagglutinin (PHAA) as positive control. The optimum conditions were as follows: the survival rate of fresh or frozen peripheral blood PBMC was more than 90%, and the optimum number of cells was 2 脳 105 / well. The optimum reaction time was 16h, the content of virus particles 146S was 100ng / mL, the optimum concentration of polypeptide was 10 渭 g / mL PHA, and the best concentration was 20 渭 g/mL.ELISpot technique to detect interferon 緯 (IFN- 緯) in pigs infected with foot-and-mouth disease virus (FMDV). It lays a foundation for evaluating the immunity of foot-and-mouth disease (FMD), evaluating the immune effect of FMD vaccine and further studying its correlation with vaccine protective ability (PD50).
【作者單位】： 大連市動物疫病預(yù)防控制中心;大連大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81172777) 大連市科技計劃基金(2014B11NC096)
【分類號】：S852.4

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本文編號：1688710