發(fā)布時間：2018-03-16 06:01

  本文選題：牛　切入點：METTL　出處：《東北農業(yè)大學學報》2017年08期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：m~6A甲基轉移酶(methyltransferase-like protein 3,METTL3)可調控m RNA的m6A甲基化水平,調節(jié)細胞蛋白質合成,實驗室前期發(fā)現(xiàn)METTL3為乳腺上皮細胞乳合成重要調節(jié)分子,發(fā)揮泌乳調節(jié)作用。目前尚不清楚METTL3分子結構基礎及其參與的調節(jié)機制。為揭示METTL3結構與功能關系,對METTL3蛋白作原核表達及純化。研究采用PCR方法擴增牛mettl3基因完整CDS區(qū),將CDS區(qū)插入原核表達載體p GEX-4T-1,異丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)誘導METTL3蛋白大量表達,用8 mol·L-1尿素裂解包涵體,利用GST蛋白純化試劑盒純化誘導獲得METTL3蛋白。SDS-PAGE證實GST-METTL3融合蛋白存在于包涵體內,試驗獲得高純度GST-METTL3融合蛋白,為進一步研究METTL3蛋白在奶牛泌乳中作用提供重要依據。
[Abstract]:Methyltransferase-like protein 3 (METTL3) can regulate m6A methylation level of m RNA and regulate cell protein synthesis. METTL3 was found to be an important regulatory molecule in mammary epithelial cell milk synthesis. In order to reveal the relationship between the structure and function of METTL3, the prokaryotic expression and purification of METTL3 protein were studied. The complete CDS region of bovine mettl3 gene was amplified by PCR. The CDS region was inserted into the prokaryotic expression vector pGEX-4T-1. Isopropyl thiothio- 尾 -Dgalactoside (IPTG) induced a large number of METTL3 protein expression, and the inclusion body was decomposed with 8 mol 路L -1 urea. METTL3 protein. SDS-PAGE of GST protein purification kit showed that GST-METTL3 fusion protein existed in inclusion body, and high purity GST-METTL3 fusion protein was obtained, which provided important basis for further study on the role of METTL3 protein in dairy cow lactation.
【作者單位】： 東北農業(yè)大學黑龍江省高校農業(yè)生物功能基因重點實驗室;
【基金】：國家高技術研究發(fā)展計劃(863計劃)項目(2013AA102504-03)
【分類號】：S823

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本文編號：1618610