本文選題：內(nèi)彎宮脂線蟲　切入點(diǎn)：環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增　出處：《中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)》2017年02期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：為建立內(nèi)彎宮脂線蟲(H.aduncum)的LAMP-LFD快速檢測技術(shù),本研究將環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)(LAMP)與橫向流動(dòng)試紙條(LFD)的檢測方法結(jié)合,以內(nèi)彎宮脂線蟲核糖體DNA(r DNA)的內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)(ITS)序列為檢測靶標(biāo),設(shè)計(jì)了3對(duì)特異性引物(其中上游內(nèi)引物由生物素標(biāo)記)進(jìn)行LAMP擴(kuò)增反應(yīng),產(chǎn)物與經(jīng)異硫氰酸熒光素(FITC)標(biāo)記的探針雜交,在LFD上完成結(jié)果顯示。結(jié)果表明,LAMP-LFD方法能夠特異性地檢測內(nèi)彎宮脂線蟲,對(duì)簡單異尖線蟲等8種其它常見魚類寄生蠕蟲檢測呈陰性。對(duì)含有內(nèi)彎宮脂線蟲r DNA-ITS2序列的重組質(zhì)粒的檢測靈敏度為1.4×10~2拷貝/μL,為常規(guī)PCR檢測方法的100倍;對(duì)內(nèi)彎宮脂線蟲第三期幼蟲,單蟲檢測靈敏度為單條蟲體基因組DNA的10-6倍。優(yōu)化后LAMP檢測時(shí)程僅40 min。對(duì)實(shí)際樣品的檢測結(jié)果表明,LAMP-LFD方法檢測內(nèi)彎宮脂線蟲與PCR結(jié)合測序方法獲得的結(jié)果一致。因此,利用LAMP-LFD能夠特異、靈敏、高效地檢測出內(nèi)彎宮脂線蟲,具有在該線蟲的檢驗(yàn)檢疫中良好的應(yīng)用前景。
[Abstract]:In order to establish a rapid LAMP-LFD detection technique for H. aduncumum, the method of loop mediated isothermal amplification (Lamp) and lateral flow test strip (LFDs) was combined in this study. Three pairs of specific primers (including upstream primers labeled by biotin) were designed to detect the internal transcriptional spacer (DNA(r) sequence of nematodes. The product was hybridized with a probe labeled with fluorescein isothiocyanate (FITC). The results on LFD showed that the LAMP-LFD method could specifically detect the nematode. The detection sensitivity of the recombinant plasmid containing r DNA-ITS2 sequence was 1.4 脳 10 ~ 2 copies / 渭 L, which was 100 times higher than that of the conventional PCR method. The third stage larva of Dioscorea innervalis, The detection sensitivity of single worm was 10-6 times as high as that of genomic DNA of single worm. The detection time course of optimized LAMP was only 40 mins. The detection results of real samples showed that the results obtained by LAMP-LFD method were consistent with those obtained by PCR binding sequencing. LAMP-LFD can be used to detect the nematodes specifically, sensitively and efficiently, and has a good application prospect in the inspection and quarantine of the nematode.
【作者單位】： 寧波大學(xué)生物技術(shù)系;舟山出入境檢驗(yàn)檢疫局;
【基金】：國家高技術(shù)研究發(fā)展計(jì)劃(863計(jì)劃)(2012AA020101) 浙江省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(LY14C180002) 浙江省科技計(jì)劃項(xiàng)目(2012C32016) 寧波市科技創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目(2015C110018) 寧波市科技富民項(xiàng)目(2016C10042)
【分類號(hào)】：S852.7

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 張少雷;王何蘭;劉江;倪芳;徐世三;羅大民;;熒光定量PCR檢測異尖線蟲類病原體[J];中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志;2010年03期

2 曹庭盛;李孝軍;蔡渭明;杜愛芳;;簡單異尖線蟲PCR檢測方法的建立[J];中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào);2009年04期

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 喬艷;周前進(jìn);李孝軍;陳炯;;內(nèi)彎宮脂線蟲環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增聯(lián)合橫向流動(dòng)試紙條檢測方法的建立[J];中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào);2017年02期

2 張少華;駱學(xué)農(nóng);李雪強(qiáng);才學(xué)鵬;;豆?fàn)顜Ы{蟲肌動(dòng)蛋白基因克隆及其作為分子內(nèi)參的應(yīng)用[J];中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志;2016年01期

3 樊海平;吳斌;龔暉;張偉妮;廖碧釵;鄭磊;林麗聰;宋振榮;馬平;陳植;;福建省水產(chǎn)動(dòng)物疾病學(xué)科發(fā)展研究報(bào)告[J];海峽科學(xué);2016年01期

4 王英超;甘琴華;厲艷;紀(jì)瑛;吳興海;邵秀玲;;基于gpd基因的大蒜黑腐病菌實(shí)時(shí)熒光定量PCR鑒定技術(shù)[J];中國農(nóng)業(yè)科學(xué);2015年02期

5 周洋;陳家旭;蔡玉春;;異尖線蟲病診斷技術(shù)研究進(jìn)展[J];中國人獸共患病學(xué)報(bào);2013年05期

6 周洋;陳家旭;陳韶紅;蔡玉春;盧艷;田利光;;異尖線蟲Ⅲ期幼蟲可溶性抗原組分分析[J];中國病原生物學(xué)雜志;2013年04期

7 李孝軍;施進(jìn);陳宇;唐行忠;洪青林;;鯖魚中寄生的1種異尖科線蟲rDNA-ITS序列的PCR擴(kuò)增及分析[J];黑龍江畜牧獸醫(yī);2013年05期

8 官威;夏超明;;核酸定量擴(kuò)增技術(shù)在寄生蟲及病原微生物診斷中的研究進(jìn)展[J];國際醫(yī)學(xué)寄生蟲病雜志;2012年04期

9 李孝軍;耿新輝;唐行忠;洪青林;;簡單異尖線蟲肌鈣蛋白類過敏原基因的克隆表達(dá)及免疫特性分析[J];畜牧與獸醫(yī);2012年07期

10 李孝軍;陳宇;唐行忠;洪青林;;進(jìn)境太平洋鱈魚寄生的異尖科線蟲rDNA-ITS序列的PCR擴(kuò)增及分析[J];中國畜牧獸醫(yī);2012年06期

【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 張少雷;徐世三;羅大民;;臺(tái)灣海峽異尖線蟲病病原線蟲幼蟲的rDNA序列分析[J];中國人獸共患病學(xué)報(bào);2009年07期

2 曹庭盛;李孝軍;蔡渭明;杜愛芳;;簡單異尖線蟲PCR檢測方法的建立[J];中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào);2009年04期

3 張錦秀;晁生玉;丁敏;李剛;;檢測豬圓環(huán)病毒2型SYBR Green Ⅰ熒光定量PCR方法的建立[J];中國畜牧獸醫(yī);2008年09期

4 周立;梁冰;趙友云;黃露;王業(yè)富;;實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測日本血吸蟲[J];中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志;2008年04期

5 黃芳;湯林華;陳博;周水森;王琴美;;實(shí)時(shí)熒光定量PCR測定瑞香素類抗瘧化合物對(duì)惡性瘧原蟲核糖核酸還原酶基因表達(dá)的影響[J];中國病原生物學(xué)雜志;2008年04期

6 阮廷清;張鴻滿;;我國海魚感染異尖線蟲調(diào)查研究進(jìn)展[J];中國人獸共患病學(xué)報(bào);2007年09期

7 李亮;徐真;張路平;;魚類寄生宮脂屬線蟲研究進(jìn)展[J];寄生蟲與醫(yī)學(xué)昆蟲學(xué)報(bào);2006年04期

8 李會(huì)敏;徐真;張路平;;異尖屬線蟲研究進(jìn)展[J];中國病原生物學(xué)雜志;2006年05期

9 林瑞慶;張新高;胡友蘭;李國清;翁亞彪;宋慧群;朱興全;;豬食道口線蟲ITS-1和ITS-2rDNA的PCR-SSCP分析[J];中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào);2006年03期

10 黃維義;異尖線蟲Ⅲ期幼蟲在不同條件下生存試驗(yàn)及人工感染大鼠觀察[J];中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志;2005年02期

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 李亮;徐真;張路平;;黃海和渤海經(jīng)濟(jì)魚類感染內(nèi)彎宮脂線蟲的調(diào)查[J];中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志;2007年05期

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前3條

1 劉園園;中國海洋魚類寄生宮脂屬線蟲（蛔總科：異尖科）分子分類學(xué)研究[D];河北師范大學(xué);2013年

2 李亮;黃海魚類寄生宮脂屬線蟲分類學(xué)研究（蛔總科：針蛔科）[D];河北師范大學(xué);2007年

3 杜春霞;黃海魚類寄生異尖屬線蟲幼蟲及內(nèi)彎宮脂線蟲的分子鑒定[D];河北師范大學(xué);2008年

，

本文編號(hào)：1559581