發(fā)布時(shí)間：2018-02-26 22:32

  本文關(guān)鍵詞： 豬 呼吸道疾病 多重PCR 檢測(cè)方法　出處：《中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)》2017年07期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：為建立能夠同時(shí)檢測(cè)7種導(dǎo)致豬呼吸道綜合癥疾病病原的多重PCR方法,參考偽狂犬病病毒(PRV)、豬瘟病毒(CSFV)、非洲豬瘟病毒(ASFV)、豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)、副豬嗜血桿菌(HPS)、多殺性巴氏桿菌(PM)以及胸膜肺炎放線桿菌(APP)標(biāo)準(zhǔn)毒株序列,選擇各病毒和細(xì)菌的保守序列分別設(shè)計(jì)7對(duì)特異性引物進(jìn)行多重PCR。各項(xiàng)優(yōu)化試驗(yàn)結(jié)果表明,當(dāng)反應(yīng)的退火溫度為51℃,各條引物濃度均為0.8μmol/L時(shí)擴(kuò)增的目的條帶效果最佳;用敏感性試驗(yàn)檢測(cè)該反應(yīng)中各病毒的最小檢出量分別為:1.01×10~2(PRV)、1.48×10~3(CSFV)、1.07×10~4(ASFV)、9.73×10~3(PRRSV)、1.82×10~3(HPS)、1.65×10~3(PM)和3.64×10~3(APP)copies/μL。在最優(yōu)化的反應(yīng)條件下進(jìn)行特異性試驗(yàn),結(jié)果未出現(xiàn)交叉反應(yīng),能檢出對(duì)應(yīng)病原的多種血清型,陰性對(duì)照均無(wú)非特異性擴(kuò)增。該方法快捷、靈敏、特異性高,可為臨床診斷與流行病學(xué)研究提供科學(xué)依據(jù)。
[Abstract]:In order to establish a multiplex PCR method for simultaneous detection of seven pathogens leading to swine respiratory syndrome (SRS), Reference was made to the standard strains of pseudorabies virus (PRV), swine fever virus (CSFV), African swine fever virus (ASFV), porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSVV), Haemophilus parahaemophilus (HPSV), Pasteurella multocida (PMN) and Actinobacillus pleuropneumoniae (APP). Seven pairs of specific primers were designed for multiplex PCRs with conserved sequences of each virus and bacteria. The results showed that when the annealing temperature of the reaction was 51 鈩，

本文編號(hào)：1539946