本文關(guān)鍵詞： 綿羊肺炎支原體 p蛋白 表達(dá)　出處：《中國(guó)畜牧獸醫(yī)》2017年02期 　論文類(lèi)型：期刊論文

【摘要】：為分析綿羊肺炎支原體(Mycoplasma ovipneumoniae,MO)膜表面脂蛋白p60的免疫學(xué)特性,本研究分別擴(kuò)增p60蛋白N端與C端的基因,并通過(guò)重疊延伸PCR將C端基因序列中的TGA(1 459-1 461bp)定點(diǎn)突變?yōu)橥x密碼子TGG。將擴(kuò)增的基因片段分別插入到pET-32a(+)表達(dá)載體上,重組質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)化至大腸桿菌BL21(DE3)感受態(tài)細(xì)胞中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá),得到分子質(zhì)量約57ku的p60-N蛋白和分子質(zhì)量約為30.5ku的p60-C蛋白;再對(duì)純化后的重組蛋白進(jìn)行Western blotting分析,結(jié)果表明重組蛋白均可與MO陽(yáng)性血清發(fā)生特異性免疫學(xué)反應(yīng),表明表達(dá)的重組蛋白p60-N和p60-C均有良好的反應(yīng)原性。本研究為篩選MO主要的免疫原性蛋白和建立特異的血清學(xué)診斷方法提供了依據(jù)。
[Abstract]:In order to analyze the immunological characteristics of membrane surface lipoprotein p60 of Mycoplasma ovis pneumoniae MOA, the N-terminal and C-terminal genes of p60 protein were amplified, respectively. The TGA(1 459-1 461bp in C terminal gene sequence was mutated into synonymous codon TGG by overlapping extension PCR. The amplified gene fragments were inserted into pET-32a () expression vector, respectively. The recombinant plasmids were transformed into Escherichia coli BL21DE3) and induced to express the p60-N protein with molecular weight of 57ku and p60-C protein with molecular weight of 30.5ku. The purified recombinant protein was analyzed by Western blotting. The results showed that the recombinant protein could react specifically with MO positive serum. The results showed that the recombinant proteins p60-N and p60-C had good reactivity. This study provided a basis for screening the major immunogenic proteins of MO and establishing a specific serological diagnostic method.
【作者單位】： 內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院微生物與免疫實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：內(nèi)蒙古自治區(qū)科技計(jì)劃“舍飼肉羊疫病動(dòng)態(tài)防控關(guān)鍵技術(shù)研究”(201502070) 國(guó)家科技支撐計(jì)劃“重點(diǎn)牧區(qū)”生產(chǎn)生態(tài)生活“保障技術(shù)集成與示范”(2012BAD13B00)
【分類(lèi)號(hào)】：S852.62

【參考文獻(xiàn)】

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【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1535075