本文關鍵詞： 綿羊 Nanog啟動子 載體構建 表達活性分析　出處：《中國獸醫(yī)學報》2017年07期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：通過比對人、鼠、兔和牛的Nanog啟動子保守區(qū)設計引物,PCR擴增綿羊Nanog基因啟動子序列并分析其調控位點。將其連接到去掉自身CMV啟動子的pAcGFP1-N1載體上,構建一個由Nanog啟動子帶動的真核表達載體(SNanog-pAcGFP1-N1),即構建一個能由該啟動子序列帶動并產生綠色熒光蛋白(GFP)的真核表達載體,并用脂質體法轉染入終末分化細胞(小鼠成纖維細胞和綿羊成纖維細胞)、胚胎干細胞和小鼠胚胎,檢測其表達活性。結果顯示:成功克隆出1 836bp Nanog啟動子序列,通過分析發(fā)現(xiàn)該序列含有SP1結合位點、CAAT框、TATA框等功能區(qū);當轉染SNanog-pAcGFP1-N1重組質粒后,小鼠胚胎和小鼠胚胎干細胞中能檢測到綠色熒光,且在轉染72h后達到最大熒光強度,而在小鼠成纖維細胞和綿羊成纖維細胞中不能觀察到GFP。結果表明:本試驗成功克隆獲得綿羊Nanog啟動子,所構建的真核表達載體具有在多能干細胞中特異性表達活性。
[Abstract]:Primers were designed by comparing the conserved region of Nanog promoter between human, mouse, rabbit and cow. The promoter sequence of sheep Nanog gene was amplified by PCR and its regulatory site was analyzed. The promoter was ligated to the pAcGFP1-N1 vector that removed its own CMV promoter. A Nanog promoter driven eukaryotic expression vector SNanog-pAcGFP1-N1) was constructed. A eukaryotic expression vector was constructed which was driven by the promoter sequence and produced green fluorescent protein (GFP) and transfected into terminal differentiation cells (mouse fibroblasts and sheep fibroblasts) by liposome method. The expression activity of embryonic stem cells and mouse embryos was detected. The results showed that 1 836 BP Nanog promoter sequence was cloned successfully and the sequence contained SP1 binding site. CAAT frame, Tata box and other functional areas; After transfection of SNanog-pAcGFP1-N1 recombinant plasmid, green fluorescence could be detected in mouse embryo and mouse embryonic stem cells, and the maximum fluorescence intensity was reached 72 hours after transfection. GFP was not observed in mouse fibroblasts and sheep fibroblasts. The results showed that sheep Nanog promoters were cloned successfully in this experiment. The constructed eukaryotic expression vector has specific expression activity in pluripotent stem cells.
【作者單位】： 東北林業(yè)大學生命科學學院;
【基金】：東北林業(yè)大學大學生科研訓練項目;東北林業(yè)大學生命科學學院大學生創(chuàng)新資助項目 國家自然科學基金資助項目(31000990)
【分類號】：Q78;S826
【正文快照】： *Corresponding author,E-mail:wangchunsheng79@163.comNanog基因最早在小鼠囊胚期的內細胞團、胚胎干細胞以及原始生殖細胞中發(fā)現(xiàn)[1-2]。該基因編碼的同源異型框蛋白,能繞過LIF/Stat3通路維持ES細胞的自我更新能力,在囊胚形成后的第2個胚胎命運的特化中發(fā)揮關鍵作用。隨后的

【參考文獻】

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【共引文獻】

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本文編號：1483109