本文關(guān)鍵詞： GnRH 主動免疫 雄性藏綿羊 甲狀腺功能　出處：《四川農(nóng)業(yè)大學》2015年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：20世紀60年代末期,激素免疫學的產(chǎn)生為動物生殖調(diào)控提供了新思路。用外源性GnRH主動免疫動物,會刺激動物機體產(chǎn)生大量GnRH特異性抗體,引起生殖內(nèi)分泌系統(tǒng)平衡的失調(diào),改變下丘腦-垂體-性腺軸間的正常反饋調(diào)節(jié)關(guān)系,以減少生殖激素的合成和分泌及終止配子的發(fā)生,從而達到免疫去勢的目的。GnRH主動免疫可避免外科閹割引起的動物高度應(yīng)激、外科傷口容易感染,增加動物發(fā)病率甚至導(dǎo)致動物死亡等諸多不足,已成為最有望替代外科閹割的安全友好方法。本試驗用蛋白結(jié)構(gòu)修飾后的GnRH并列體二聚物(G6k-GnRH-Tandem-Dimer)與卵清蛋白偶聯(lián),以Specol為佐劑,主動免疫雄性藏綿羊,以研究其對雄性藏綿羊甲狀腺功能的影響。試驗選取24周齡、體重17-19 Kg的雄性藏綿羊30只,隨機分為三組,每組10只。其中一組于25周齡時各只綿羊頸部皮下注射2 mLGnRH并列體二聚物卵清蛋白復(fù)合物(TDK-OVA)的Specol乳化劑(含TDK 100 μg),8周后加強免疫一次,注射劑量及方法同初次免疫,為免疫去勢組。一組在試驗開始前一周進行外科手術(shù)去勢,為手術(shù)去勢組。剩余一組不做任何處理,為完整對照組。初次免疫當天記為0 wpv。初免當天及初免后第4、8、12、16 wpv(即每4周1次,直至屠宰)頸靜脈采集血樣,酶聯(lián)免疫法(ELISA)測定血清抗體滴度及LH、FSH、T、TSH、T3、T4含量變化。加強免疫后8周(即16 wpv),屠宰所有試驗綿羊,分離下丘腦、垂體及兩側(cè)睪丸。Real-Time quantitative PCR分析下丘腦、垂體生殖相關(guān)基因(GnRH-R、TSH-β、TRH、TSH-R、MT1、MT2、DIO2、DIO3) mRNA表達變化。結(jié)果顯示,免疫去勢組產(chǎn)生了良好的抗體反應(yīng),初免后機體產(chǎn)生抗體,加免后血清抗GnRH抗體滴度快速升高,由加免當天的18.67%升高到12周(12 wpv)的最高峰(55.62%),后保持在較高水平,直至屠宰(48.85%)。與完整對照組相比,免疫去勢組血清T含量顯著下降(p0.05),屠宰時仍維持在較低水平(4.27ng/mL).與完整對照組相比,手術(shù)去勢組和免疫去勢組血清T3和T4無顯著下降(p0.05),GnRH主動免疫顯著下調(diào)綿羊垂體GnRH-R、TSH-β及下丘腦TRH、TSH-R、DI02mRNA表達水平(p0.05),而手術(shù)去勢組綿羊垂體GnRH-R mRNA表達水平顯著高于免疫去勢組和完整對照組(p0.05)。屠宰時,完整對照組睪丸平均重量為51.71±7.58 g,平均體積為49.04±6.66 cm3,免疫去勢組睪丸平均重量為41.58±5.77 g,平均體積為39.91±6.02 cm3。與完整對照組相比,免疫去勢組藏綿羊睪丸發(fā)生萎縮,其重量及體積均下降到對照組睪丸的80%(p0.05)上述研究結(jié)果表明：GnRH主動免疫盡管使下丘腦TRH、TSH-R、DI02、DI03及垂體TSH-β mRNA表達水平下調(diào),但對血清中TSH、T3及T4濃度無明顯影響�？傊�,GnRH主動免疫對雄性藏綿羊甲狀腺功能無不利影響。
[Abstract]:In the end of 1960s, the production of hormone immunology provided a new idea for animal reproductive regulation. Active immunization with exogenous GnRH can stimulate animal body to produce a large number of GnRH specific antibodies. It causes the imbalance of reproductive endocrine system and changes the normal feedback regulation relationship between hypothalamus-pituitary-gonad axis in order to reduce the synthesis and secretion of reproductive hormones and the termination of gametes. In order to achieve the purpose of immune castration. GnRH active immunization can avoid high stress caused by surgical castration, surgical wounds are prone to infection, increase animal morbidity and even lead to animal death and many other deficiencies. It has become the most promising safe and friendly method for surgical castration. In this study, the GnRH paratactic dimer (G6k-GnRH-Tandem-Dimer) was modified with protein structure. Coupled with ovalbumin. Male Tibetan sheep were immunized with Specol as adjuvant to study its effect on thyroid function of male Tibetan sheep. They were randomly divided into three groups. At 25 weeks of age, one sheep was subcutaneously injected with Specol emulsifier (TDK-OVA) for 2 mLGnRH paratactic dimer ovalbumin complex (TDK-OVA). TDK 100 渭 g). Once after 8 weeks, the dose and method of immunization were the same as the primary immunization group. One group underwent surgical castration one week before the trial, and the remaining group did not do any treatment. The first immunization day was 0 wpv.The blood samples were collected from jugular vein on the day of the first immunization and after the first immunization at 81216 wpv (that is once every 4 weeks until slaughtering). Elisa was used to determine the titer of serum antibody and the content of TSHT3T4 in serum. All the tested sheep were slaughtered 8 weeks after immunization. The hypothalamus, pituitary and bilateral testis. Real-time quantitative PCR were isolated to analyze the hypothalamus and pituitary gene-related gene GnRH-RnTSH- 尾. The results showed that the immune ovariectomized group had a good antibody response, and the body produced antibody after the first immunization. The titer of serum anti GnRH antibody increased rapidly from 18.67% on the day of administration to the highest peak of 55.62% at 12 weeks and remained at a higher level. Compared with the intact control group, the serum T content in the ovariectomized group decreased significantly (p 0.05). The serum T3 and T4 levels in ovariectomized group and immune castrated group were not significantly decreased compared with the control group (P 0.05). The expression of GnRH-RnTSH- 尾 and TRH-TSH-RnDI02 mRNA in hypothalamus was significantly down-regulated by GnRH (p0.05). However, the expression of GnRH-R mRNA in the pituitary gland of the ovariectomized sheep was significantly higher than that of the ovariectomized group and the intact control group. The average weight and volume of testis were 51.71 鹵7.58 g and 49.04 鹵6.66 cm ~ (3) in the intact control group and 41.58 鹵5.77 g in the castration group respectively. The average volume was 39.91 鹵6.02 cm ~ (3). Compared with the control group, the testis of Tibetan sheep in the immune castrated group were atrophied. The weight and volume decreased to 80% of the testis of the control group (p 0.05). The results showed that the hypothalamus TRH TSH-RH DI02 was induced by the active immunization of 1% GnRH. The expression of TSH- 尾 mRNA in DI03 and pituitary gland was down-regulated, but there was no significant effect on serum TSH-T _ 3 and T _ 4 levels. GnRH active immunization had no adverse effect on thyroid function of male Tibetan sheep.
【學位授予單位】：四川農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：S826

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