酵母雙雜交系統(tǒng)篩選豬流行性腹瀉病毒N蛋白互作的宿主蛋白
本文關(guān)鍵詞: 豬流行性腹瀉病毒 酵母雙雜交 N蛋白 蛋白互作 出處:《中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報》2017年11期 論文類型:期刊論文
【摘要】:為了獲得豬流行性腹瀉病毒(PEDV)N蛋白與宿主細(xì)胞中的互作蛋白,本研究構(gòu)建PEDV N蛋白基因的重組載體p GBKT7-N,以其作為誘餌質(zhì)粒,采用酵母雙雜交方法,從豬肺泡巨噬細(xì)胞(PAM)cDNA文庫中篩選出與N蛋白相互作用的蛋白。結(jié)果表明,誘餌蛋白在酵母雙雜交系統(tǒng)中不存在毒性和自激活作用,而且篩選出6種與N蛋白互作的蛋白,分別為FTH1、LGALS3、CORO1C、SNRPG、KRTAP5-3和ZNF598。其中半乳糖凝集素3(LGALS3)和小核糖蛋白G(SNRPG)通過回返試驗(yàn)和免疫共沉淀試驗(yàn)證實(shí)其與PEDV的N蛋白存在特異性相互作用。本研究為進(jìn)一步研究PEDVN蛋白的功能及病毒的致病機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:In order to obtain the interaction protein between PEDVN protein and host cells of porcine epidemic diarrhea virus, the recombinant vector p GBKT7-N of PEDV N protein gene was constructed in this study. The protein interacting with N protein was isolated from porcine alveolar macrophage (Pam) cDNA library by yeast two-hybrid method. The bait protein had no toxicity and self-activation in yeast two-hybrid system, and the six proteins interacting with N protein were identified as FTH1GALS3CORO1CnSNRPG. KRTAP5-3 and ZNF598. among them, galactose agglutinin 3 (LGALS3) and small nuclear glycoprotein (GSNRPG). The results of return test and immunoprecipitation test showed that there was a specific interaction between PEDVN protein and the N protein of PEDV. This study laid a foundation for further study on the function of PEDVN protein and the pathogenesis of the virus.
【作者單位】: 河南科技大學(xué);中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所;
【基金】:國家自然科學(xué)基金(31201915;31502071) 上海市科技興農(nóng)重點(diǎn)攻關(guān)項目[滬農(nóng)科攻字(2013)第3-6號,第5-5號]
【分類號】:S852.651
【正文快照】: *Corresponding author豬流行性腹瀉(Porcine epidemic diarrhea,PED)是由PEDV感染引起的一種急性接觸性腸道傳染病,該病在臨床上主要特征為腹瀉、嘔吐、脫水和對7日齡以內(nèi)的哺乳仔豬高致死率(100%)。自2010年以來,以變異PEDV為主要病原體的仔豬腹瀉在我國爆發(fā),并迅速席卷全國
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3 王,
本文編號:1475296
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