本文關鍵詞： 豬鏈球菌 分支酸合成酶 細胞因子　出處：《華中農業(yè)大學》2015年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：豬鏈球菌(Streptococcus suis,S.suis)是一種重要的人獸共患病原菌,根據(jù)莢膜多糖可以分為33個血清型(1-31,33和1/2型),其中豬鏈球菌2型(streptococcus suis serotype 2)分布最廣、危害最嚴重。豬群感染豬鏈球菌后,通常會表現(xiàn)出如下癥狀:如關節(jié)炎、腦膜腦炎、心內膜炎、或者敗血癥等。病豬感染豬鏈球菌后其免疫系統(tǒng)會被激活,有利于病豬抵抗豬鏈球菌的侵襲,但是如果宿主應對侵襲免疫反應過度時可能會導致病情進一步加深產生敗血性休克。有研究用滅活的豬鏈球菌刺激人或鼠的星形膠質細胞或巨噬細胞發(fā)現(xiàn)能產生較高的促炎細胞因子。這些研究也說明豬鏈球菌中存在一些促炎性組分,并且這些組分在導致宿主產生敗血癥過程中發(fā)揮著重要的作用,但是這些組分有待于進一步鑒定及驗證。本研究驗證了豬鏈球菌表面蛋白分支酸合成酶的促炎性作用,并對其引起炎性反應的具體機制開展進一步研究�，F(xiàn)將主要研究報告如下:1.豬鏈球菌2型分支酸合成酶在小鼠巨噬細胞RAW264.7上的促炎性研究體外在大腸桿菌中表達并純化分支酸合成酶,以RAW264.7細胞為模型研究分支酸合成酶的促炎性。結果顯示該蛋白能引起RAW264.7細胞產生較高水平的IL1-β與TNF-α。2.豬鏈球菌2型分支酸合成酶促炎機制研究研究發(fā)現(xiàn)TLR4的抗體能阻斷分支酸合成酶所引起的促炎性反應,并且TLR2的抗體不能阻斷這一反應。實驗結果顯示NF-κB和P38參與Aro C刺激RAW264.7后引起的IL-1β的上調;而NF-κB參與Aro C刺激RAW264.7后引起的TNF-α的上調。3.豬鏈球菌2型aro C基因缺失突變株的構建及其生物學特性分析實驗構建了aro C基因缺失的豬鏈球菌突變株,之后對突變株的生物學特性進行分析,結果顯示aro C基因缺失與野生菌株SC19的生長曲線無明顯區(qū)別,革蘭氏染色鏡檢也無明顯差別。小鼠攻毒實驗顯示aro C缺失菌株相對野生菌SC19毒力明顯減弱,aro C參與細菌芳香族氨基酸的合成,該酶缺失的菌株表現(xiàn)為營養(yǎng)匱乏型,在宿主體內由于缺少必需的氨基酸而無法正常生長,表現(xiàn)出較低的毒力。4.豬鏈球菌2型aro C基因缺失突變株與野生菌株SC19誘導炎巨噬細胞產生炎性應答的比較研究發(fā)現(xiàn)aro C基因缺失突變株相對野生菌株SC19能誘導更高水平的IL1-β與TNF-α;分離野生BALB/C小鼠腹腔巨噬細胞也得到了類似的結果。由于分支酸合成酶主要產于營養(yǎng)物質的代謝,猜測aro C基因缺失后可能會導致細菌暴露出了更多的促炎性反應介質,進而導致其能產生更高的炎性反應。5.豬鏈球菌感染小鼠不同時期豬鏈球菌分支酸合成酶的表達變化取合適劑量SC19感染小鼠,分別選取感染不同時期從血里面分離細菌,之后用實時熒光定量的方法檢測該基因在感染不同時期的表達水平的變化。結果顯示,在9h時該基因表達量最高,之后慢慢下降。以上結果表明,aro C基因在豬鏈球菌感染小鼠過程中發(fā)揮著一定的作用,不同時期表達有一個明顯的變化
[Abstract]:Streptococcus suis (Streptococcus suis S.suis) is an important zoonotic pathogen, the capsular polysaccharide can be divided into 33 serotypes (1-31,33 and 1/2), including Streptococcus suis serotype 2 (Streptococcus suis serotype 2) the most widely distributed, the most serious harm. Pigs infected with Streptococcus suis, usually exhibit the following symptoms: such as arthritis, meningitis, endocarditis, or septicemia. Disease of Swine Streptococcus suis infection after the immune system will be activated, conducive to disease resistance of Swine Streptococcus suis invasion, but if the host immune response to invasion over time can cause the condition to further produce septic shock. Some studies with inactivated Streptococcus suis stimulation of human or mouse astroglial cells or macrophages that proinflammatory cytokines can produce higher. These studies also indicate that some proinflammatory components exist in Streptococcus suis and this. Some components in the resulting host plays an important role in the process of sepsis, but these components need to be further identified and verified. This study confirms the pro-inflammatory effects of the surface protein of Streptococcus suis chorismate synthase, and the specific mechanisms of inflammatory reaction further research development. The main research are as follows type 2: Branch acid synthase 1. Streptococcus suis proinflammatory in vitro in mouse macrophages on RAW264.7 expressed in Escherichia coli and purified chorismate synthase, RAW264.7 cells were taken as the study model branch acid synthase proinammatory. The results showed that the protein can induce RAW264.7 cells to produce higher levels of IL1- beta and TNF- alpha.2. of Streptococcus suis serotype 2 type chorismate synthase proinflammatory mechanisms research found that TLR4 antibody can inhibit the inflammatory response caused by chorismate synthetase, and TLR2 antibody could not stop Break this reaction. The experimental results show that NF- and P38 caused by kappa B in Aro C after RAW264.7 stimulation of IL-1 beta increases; the plant construction and biological characteristic analysis of experimental construction of aro C gene deletion mutant of Streptococcus suis caused NF- kappa B in Aro C RAW264.7 after the stimulation of TNF- alpha upregulated.3. of Streptococcus suis type 2 aro C gene deletion mutation, then the biological characteristics of the mutant were analyzed, the results showed no significant difference between the growth curve of aro C gene deletion and SC19 wild strains, Gram staining also showed no significant difference. Mouse challenge experiments showed that aro C deletion mutant relative to the wild strain SC19 markedly attenuated virulence, aro C involved in the synthesis of bacteria aromatic amino acids, the enzyme deficient strains showed a lack of nutrition, in vivo due to the lack of essential amino acids to normal growth, showed low virulence of Streptococcus suis type 2 aro.4. The C gene deletion mutant compared with wild-type strain SC19 induced inflammatory macrophages to produce inflammatory response aro C mutant relative to wild-type strain SC19 can induce higher levels of IL1- and TNF- alpha beta; from wild mouse peritoneal macrophages BALB/C also yielded similar results. The chorismate synthase produced mainly in nutrients the metabolism of speculation that aro C gene deletion may cause bacteria exposed to proinflammatory mediators more, causing it can produce proper dose of SC19 mice infected mice expression of Streptococcus suis chorismate synthetase in different periods of the inflammatory reaction of.5. of Streptococcus suis higher infection, infection were selected in different periods of bacteria isolated from blood inside, followed by real time fluorescence quantitative method to detect the changes in gene expression level in different periods of infection. The results showed that in the 9h group The results showed that aro C gene played a role in the process of Streptococcus suis infection in mice.

【學位授予單位】：華中農業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：S855.11

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 林日蘭,呂平,馬保華,包勝軍;從丹麥進口凍豬心中檢出豬鏈球菌[J];中國獸醫(yī)雜志;2001年11期

2 路振香,曾華東;豬鏈球菌的分離與鑒定[J];中國獸醫(yī)科技;2003年07期

3 劉軍,馮書章,尹鐵勇,孫洋,郭學軍,祝令偉;豬鏈球菌2型和9型菌株的多重PCR檢測[J];中國人獸共患病雜志;2005年06期

4 ;豬鏈球菌快檢法通過鑒定[J];中國動物保健;2005年08期

5 唐國策;四川豬鏈球菌疫情五特點[J];中國牧業(yè)通訊;2005年17期

6 ;上海五大措施嚴防豬鏈球菌疫情[J];中國牧業(yè)通訊;2005年17期

7 雷世榮,奉孝軍,陳富華;甘灑熱血,筑起防疫鋼鐵長城——記樂至縣畜牧食品局在抗豬鏈球菌2型病的日日夜夜[J];四川畜牧獸醫(yī);2005年09期

8 老錢;把四天縮短為四小時——《豬鏈球菌多重PCR檢測方法》問世[J];商品與質量;2005年33期

9 王家圣,韓安勤;預防豬鏈球菌發(fā)生的措施[J];動物科學與動物醫(yī)學;2005年08期

10 樊福好;豬鏈球菌不可怕[J];農業(yè)新技術(今日養(yǎng)豬業(yè));2005年05期

相關會議論文 前10條

1 聶小想;崔言順;沈志強;管宇;逄媛;劉吉山;王艷;;20株豬鏈球菌核糖體基因多態(tài)性的研究[A];首屆中國獸藥大會——獸醫(yī)生物制品學、獸醫(yī)微生物學學術論壇論文集（2008）[C];2008年

2 劉梅芬;吳志明;閆若潛;盛敏;趙明軍;拜廷陽;;豬鏈球菌種與9型豬鏈球菌二重PCR檢測方法的建立及應用[A];中國畜牧獸醫(yī)學會小動物醫(yī)學分會第四次學術研討會、中國畜牧獸醫(yī)學會獸醫(yī)外科學分會第十六次學術研討會論文集（2）[C];2009年

3 劉梅芬;吳志明;閆若潛;盛敏;趙明軍;拜廷陽;;豬鏈球菌種與9型豬鏈球菌二重PCR檢測方法的建立及應用[A];中國畜牧獸醫(yī)學會家畜傳染病學分會第七屆全國會員代表大會暨第十三次學術研討會論文集（下冊）[C];2009年

4 張安定;朱偉峰;胡攀;金梅林;;豬鏈球菌分子流行病學研究[A];第三屆全國微生物資源學術暨國家微生物資源平臺運行服務研討會會議論文摘要集[C];2011年

5 何孔旺;倪艷秀;王繼春;何家惠;王偉峰;楊瑛;陸承平;林繼煌;;豬鏈球菌2型的分子流行病學研究[A];豬的重要傳染病防治研究新成果——中國畜牧獸醫(yī)學會家畜傳染病學分會第五屆理事會第二次全體會議暨防檢疫專業(yè)委員會第7次學術交流會論文集[C];2002年

6 徐建國;鄭翰;葉長蕓;景懷琦;;豬鏈球菌的二階段致病機理假說[A];第二屆全國人畜共患病學術研討會論文集[C];2008年

7 熊毅;劉棋;覃芳蕓;朱偉;徐賢坤;付薇;;廣西豬鏈球菌2型流行病學研究[A];第二屆全國人畜共患病學術研討會論文集[C];2008年

8 臧瑩安;謝樂新;李家僑;龐木生;李淼;宋帥;李春玲;;表觀健康的豬肉攜帶豬鏈球菌的調查[A];中國畜牧獸醫(yī)學會獸醫(yī)公共衛(wèi)生學分會第三次學術研討會論文集[C];2012年

9 羅玲;徐滌平;劉澤文;鄭浩;汪宏才;;豬鏈球菌2型的研究進展[A];中國畜牧獸醫(yī)學會家畜傳染病學分會第六屆全國會員代表大會暨第11次學術研討會論文集[C];2005年

10 劉春生;徐耀輝;陳陸;楊霞;王新娟;高冬生;王永生;程海衛(wèi);劉春明;王川慶;;豬鏈球菌種及1、2、7型多重PCR檢測方法的建立及應用[A];中國畜牧獸醫(yī)學會動物傳染病學分會第四次豬病防控學術研討會論文集[C];2010年

相關重要報紙文章 前10條

1 記者 曾星;快速豬鏈球菌檢測方法問世[N];中國國門時報;2005年

2 記者 姚雷 張穎;豬鏈球菌檢測將有據(jù)可依[N];中國國門時報;2005年

3 雒慶舉;可能對“豬鏈球菌”設險嗎[N];中國保險報;2005年

4 井 韋;把四天縮短為四小時[N];中國質量報;2005年

5 菊　文;積極應對豬鏈球菌2型疫情[N];中國國門時報;2005年

6 記者 何成軍 見習記者 錢河山;豬鏈球菌疫情不足憂[N];甘肅經濟日報;2005年

7 鄭靈巧;豬鏈球菌進犯人類告訴我們什么[N];健康報;2005年

8 北京地壇醫(yī)院主任醫(yī)師 蔡皓東;豬鏈球菌又到人間作孽[N];健康報;2005年

9 記者 原國鋒;豬鏈球菌快速檢測方法通過鑒定[N];人民日報;2005年

10 逸聞;豬鏈球菌序列變異導致毒力增加[N];中國畜牧獸醫(yī)報;2006年

相關博士學位論文 前10條

1 姚新月;2型豬鏈球菌無毒株的分離鑒定與比較基因組學研究[D];第三軍醫(yī)大學;2015年

2 魏子貢;豬鏈球菌流行病學及其生物被膜形成機理研究[D];華中農業(yè)大學;2010年

3 李學瑞;豬鏈球菌防治新技術研究[D];中國農業(yè)科學院;2011年

4 吳全忠;豬鏈球菌2型在模型動物豚鼠體內的動態(tài)分布及基因免疫[D];南京農業(yè)大學;2001年

5 歐瑜;豬鏈球菌2型毒力相關蛋白的檢測及其基因片段的克隆與表達[D];南京農業(yè)大學;2001年

6 陳國強;豬鏈球菌2型檢測方法的研究及其在出入境檢疫中的應用[D];南京農業(yè)大學;2011年

7 王淑杰;東北三省豬場S suis感染狀況調查及S.suis7比較蛋白組學研究[D];東北農業(yè)大學;2013年

8 路玲玲;利用插入失活法對2型豬鏈球菌毒力因子的研究[D];中國疾病預防控制中心;2008年

9 劉曼莉;豬鏈球菌2型感染宿主后宿主表達譜的分析研究[D];華中農業(yè)大學;2011年

10 鄭霄;基于芯片的豬鏈球菌比較基因組學研究[D];中國疾病預防控制中心;2011年

相關碩士學位論文 前10條

1 李曉云;東北地區(qū)豬鏈球菌對大環(huán)內酯類抗生素耐藥機制研究[D];東北農業(yè)大學;2009年

2 趙煥燦;浙江省豬鏈球菌血清及分子流行病學調查[D];浙江大學;2010年

3 張靜;豬鏈球菌二氫硫辛酰胺脫氫酶的生物學功能初探及串聯(lián)蛋白的免疫保護評價[D];上海交通大學;2012年

4 岳修偉;上海部分地區(qū)豬鏈球菌2型流行病學調查及其耐藥性研究[D];上海交通大學;2013年

5 黃開松;豬鏈球菌2型表面精氨酸肽酶的鑒定與其功能的研究[D];華中農業(yè)大學;2015年

6 劉金;豬樹突狀細胞在豬鏈球菌2型感染致炎癥風暴中的作用研究[D];華中農業(yè)大學;2015年

7 劉建濤;豬鏈球菌2型分支酸合成酶促炎機制研究[D];華中農業(yè)大學;2015年

8 龔秀芳;2型豬鏈球菌N-乙酰半乳糖胺和半乳糖胺代謝通路中SSU0448基因功能的初步研究[D];南京師范大學;2015年

9 覃芳蕓;廣西豬鏈球菌2型流行病學研究[D];廣西大學;2008年

10 郭培元;豬鏈球菌2型的分離鑒定以及實驗性感染豬鏈球菌2型的病理學研究[D];揚州大學;2008年

，

本文編號：1469485