發(fā)布時(shí)間：2018-01-23 17:30

  本文關(guān)鍵詞： 豬繁殖與呼吸綜合征病毒 GP 原核表達(dá) 蛋白純化　出處：《西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)》2017年05期 　論文類(lèi)型：期刊論文

【摘要】：【目的】原核表達(dá)和純化豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)的結(jié)構(gòu)蛋白GP4,為深入了解其結(jié)構(gòu)和功能奠定基礎(chǔ)�！痉椒ā坎捎肦T-PCR方法擴(kuò)增PRRSV BJ-4株ORF4基因片段,將其克隆到pMD19-T載體中并進(jìn)行測(cè)序。從測(cè)序正確的重組質(zhì)粒pMD19-T-ORF4中擴(kuò)增缺失N端及C端疏水序列的基因片段tGP4(truncated GP4),再將其亞克隆到pET-32a載體并轉(zhuǎn)化到大腸桿菌BL21,IPTG進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)。對(duì)表達(dá)的重組蛋白進(jìn)行可溶性分析,使用尿素梯度法進(jìn)行蛋白純化,并通過(guò)ELISA法檢測(cè)重組蛋白的免疫活性。【結(jié)果】RT-PCR獲得了537bp的ORF4。成功構(gòu)建了原核表達(dá)載體pET-32a-tGP4,在IPTG誘導(dǎo)后重組蛋白以包涵體的形式大量表達(dá)。使用尿素梯度法獲得了純度較高的目的蛋白,純化的目的蛋白能與PRRSV陽(yáng)性血清特異性結(jié)合�！窘Y(jié)論】使用原核細(xì)胞成功表達(dá)了PRRSV的結(jié)構(gòu)蛋白GP4,純化后的重組蛋白具有很好的免疫原性。
[Abstract]:[objective] to express and purify the structural protein GP4 of porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSVV). [methods] the ORF4 gene fragment of PRRSV BJ-4 strain was amplified by RT-PCR. It was cloned into pMD19-T vector and sequenced. The deletion of N-terminal and C-terminal hydrophobic sequence tGP4 (TGP4) was amplified from the correctly sequenced recombinant plasmid pMD19-T-ORF4. Truncated GP4. The recombinant protein was subcloned into pET-32a vector and transformed into E. coli BL21. The recombinant protein was analyzed by soluble analysis and purified by urea gradient method. The immunological activity of the recombinant protein was detected by ELISA method. [results] 537 BP ORF4 was obtained by RT-PCR. The prokaryotic expression vector pET-32a-tGP4 was successfully constructed. After induction of IPTG, the recombinant protein was expressed in the form of inclusion body, and the target protein with high purity was obtained by urea gradient method. The purified target protein can specifically bind to PRRSV positive serum. [conclusion] GP4, the structural protein of PRRSV, was successfully expressed using prokaryotic cells. The purified recombinant protein has good immunogenicity.
【作者單位】： 鄭州大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;河南師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;河南農(nóng)業(yè)大學(xué)牧醫(yī)工程學(xué)院;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(31472177)
【分類(lèi)號(hào)】：S852.651
【正文快照】： 豬繁殖與呼吸綜合征是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndromevirus,PRRSV)引起的一種高度接觸性傳染病,能引起妊娠母豬后期發(fā)生流產(chǎn)、死胎、木乃伊胎[1-2]。1987年美國(guó)首先發(fā)生此病,并于1992年分離獲得PRRSV,命名為VR-2332株;1990年歐洲也

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

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【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1457829