本文關(guān)鍵詞： 水牛 陸川豬 毛色 黑素體皮質(zhì)素受體1(MC1R) 分子機(jī)制　出處：《廣西大學(xué)》2015年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：毛色是識(shí)別動(dòng)物品種和種屬的重要特征,也是動(dòng)物品種培育中遺傳一致性觀測(cè)的重要指標(biāo)。畜禽之間毛色差異主要是由于黑色素細(xì)胞中真黑素和褐黑素的存在、分布和比例差異造成。本研究以本地沼澤型水牛和陸川豬為研究對(duì)象,應(yīng)用PCR的方法克隆MC1R基因的編碼區(qū)序列,通過(guò)qRT-PCR技術(shù)分析毛色形成的相關(guān)基因(MC1R、KIT、 MITF、TYR、TYRP1、DCT和EDNRB)在不同毛色牛皮膚組織和陸川豬黑、白皮膚組織上的表達(dá),并應(yīng)用Western-blot的方法檢測(cè)MC1R、MITF和TYR蛋白在牛和陸川豬黑白皮膚上的蛋白質(zhì)表達(dá)水平,還應(yīng)用HE染色觀察了陸川豬皮膚的結(jié)構(gòu)和應(yīng)用免疫組化技術(shù)對(duì)TYR蛋白在陸川豬皮膚上定位進(jìn)行分析。主要研究結(jié)果如下：1.廣西本地沼澤水牛和陸川豬MC1R基因的克隆與分析。測(cè)序結(jié)果顯示水牛和陸川豬MC1R基因的編碼區(qū)片段大小分別為954bp和1115bp,分別編碼317個(gè)和321個(gè)氨基酸。以相同的方法克隆并測(cè)序了本地飼養(yǎng)的摩拉水牛、白化沼澤水牛和黃牛的MC1R基因序列,通過(guò)多重序列比對(duì)發(fā)現(xiàn),沼澤水牛與白化沼澤水牛MC1R基因有幾處堿基發(fā)生置換。在第476個(gè)堿基位點(diǎn)上由C→T,第618個(gè)堿基位點(diǎn)由C→G,881個(gè)堿基位點(diǎn)A→G,930和931的堿基位點(diǎn)GA→AG。第159個(gè)氨基酸由絲氨酸變成了苯丙氨酸,第310個(gè)氨基酸由谷氨酸變成丙氨酸,第294個(gè)氨基酸由天冬氨酸變成了丙氨酸,發(fā)生了非同義突變。第206個(gè)氨基酸依然是酪氨酸,該處對(duì)應(yīng)堿基發(fā)生的是同義突變。2.毛色形成相關(guān)基因在幾種牛皮膚中的表達(dá)譜構(gòu)建及蛋白表達(dá)分析。應(yīng)用qRT-PCR技術(shù),檢測(cè)了毛色形成的相關(guān)基因(MC1R、KIT、 MITF、TYR、TYRP1、DCT和EDNRB)在幾種牛皮膚組織的表達(dá)。結(jié)果顯示,白化沼澤水牛皮膚中表達(dá)的MC1R、KTI、MITF和TYR基因含量顯著低于這些基因在沼澤水牛、摩拉水牛和黃牛皮膚中的表達(dá)量(P0.05)。摩拉水牛皮膚酪氨酸酶家族(TYR、TYRP1和DCT)基因在mRNA水平表達(dá)量顯著高于沼澤水牛、白化沼澤水牛和黃牛(P0.05)。DCT基因在摩拉水牛皮膚的表達(dá)量顯著高于沼澤水牛和白化沼澤水牛(P0.05)。在白化沼澤水牛和黃牛幾乎檢測(cè)不到TYPR1的表達(dá)。應(yīng)用western-blot技術(shù),檢測(cè)MC1R、MITF和TYR基因在蛋白質(zhì)水平上在幾種牛皮膚上的表達(dá)情況。結(jié)果顯示,摩拉水牛MC1R、MITF和TYR表達(dá)量低于沼澤水牛。白化沼澤水牛在所選的這三個(gè)基因蛋白中的表達(dá)情況也是低于沼澤水牛,尤其是白化沼澤水牛TYR基因蛋白條帶非常淺,這與上一步進(jìn)行的qRT-PCR試驗(yàn)結(jié)果一致。3.毛色形成相關(guān)基因在陸川豬黑、白皮膚中的表達(dá)譜構(gòu)建及蛋白表達(dá)分析。應(yīng)用qRT-PCR技術(shù)檢測(cè)了毛色形成的相關(guān)基因(MC1R、 KIT、MITF、TYR、TYRP1、DCT和EDNRB)在同一頭陸川豬黑、白皮膚組織的表達(dá)。結(jié)果顯示,在mRNA水平,酩氨酸酶TYR基因和KIT基因在陸川豬黑、白皮膚上的表達(dá)差異不顯著(P0.05),相對(duì)表達(dá)量分別為0.8±0.05和1.38±0.04。其他基因MC1R、TYRP1和DCT基因的mRNA表達(dá)在黑皮膚中的相對(duì)表達(dá)量較高,分別為13.83±1.67,12.38±1.45和7.73±0.43,顯著高于白皮膚(P0.05)。通過(guò)HE染色結(jié)合免疫組織化學(xué)陸川豬皮膚組織結(jié)果顯示,酪氨酸酶TYR基因在陸川豬黑、白皮膚組織中均有陽(yáng)性著色,具體著色的部位是毛囊部位。Western-blot結(jié)果也顯示,陸川豬黑、白皮膚均能檢測(cè)到TYR蛋白且二者表達(dá)水平接近,結(jié)合之前的qRT-PCR檢測(cè)和免疫組化結(jié)果,均指向TYR基因在mRNA和蛋白水平上的表達(dá)差異不顯著。
[Abstract]:The expression of MC1R , KIT , MITF , TYR , TYP , DCT and EDNRB on the skin of cattle and Luchuan pigs was analyzed . The results showed that the MC1R , KIT , MITF , TYR , TYP , DCT and EDNRB genes were cloned and sequenced . The results showed that the expression of TYR gene ( MC1R , KIT , MITF , TYR , TYP1 , DCT and EDNRB ) in black and white skin of Luchuan pig was not significant ( P0.05 ) .

【學(xué)位授予單位】：廣西大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S828;S823.83

【參考文獻(xiàn)】

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1 楊厚德;林宇紓;廖玲玲;劉慶友;石德順;謝炳坤;崔奎青;;廣西德保豬MC1R基因的克隆與分析[J];基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué);2014年01期

2 苗永旺;吳桂生;王磊;李大林;湯守錕;梁建平;毛華明;羅懷容;張亞平;;黑色素皮質(zhì)素受體1基因?qū)λＣz傳的影響[J];中國(guó)科學(xué)(C輯:生命科學(xué));2009年12期

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本文編號(hào)：1455851