發(fā)布時(shí)間：2018-01-19 14:30

  本文關(guān)鍵詞： 日本血吸蟲 胰島素樣多肽 真核表達(dá) 多克隆抗體　出處：《中國(guó)獸醫(yī)科學(xué)》2017年07期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：為克隆和表達(dá)日本血吸蟲胰島素樣多肽基因(Sjilp)并制備特異性多克隆抗體,根據(jù)基因組注釋信息,設(shè)計(jì)特異性引物,利用RT-PCR技術(shù)從日本血吸蟲成蟲m RNA中成功擴(kuò)增出長(zhǎng)度為588 bp的特異性c DNA序列,其CDS序列長(zhǎng)393 bp�；诋叧嘟湍该艽a子偏好性,對(duì)Sjilp基因密碼子進(jìn)行優(yōu)化,構(gòu)建p PIC9KSjilp重組表達(dá)載體,并在畢赤酵母GS115中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)。SDS-PAGE與Western-blot檢測(cè)結(jié)果顯示,重組蛋白Sj-ILP獲得高效表達(dá),其大小約為15 ku,與預(yù)期結(jié)果一致。利用合成肽技術(shù),設(shè)計(jì)并合成得到2條特異性的肽段,偶聯(lián)KLH,免疫新西蘭大白兔,制備多克隆抗體,間接ELISA檢測(cè)其效價(jià)達(dá)到1，

本文編號(hào)：1444580