本文關鍵詞：禽坦布蘇病毒截短E蛋白單克隆抗體的制備及其抗原性分析　出處：《中國獸醫(yī)科學》2016年07期 　論文類型：期刊論文

  更多相關文章： 坦布蘇病毒 截短囊膜E蛋白 單克隆抗體 抗原性

【摘要】：為制備禽坦布蘇病毒囊膜E蛋白截短蛋白的單克隆抗體并分析其抗原性,以坦布蘇病毒YY1分離株的cDNA為模板,通過RT-PCR擴增編碼截短E蛋白的基因,并將其成功克隆到原核表達載體pET-28a(+)中。重組載體pET-28a(+)-YY1E轉化的大腸桿菌BL21(pLysS)在IPTG誘導下高效表達重組蛋白His-YY1E,該蛋白可與坦布蘇病毒感染鴨的血清反應。用純化的His-YY1E免疫小鼠制備單克隆抗體,采用有限稀釋法經(jīng)過3輪篩選和鑒定最終獲得了2株分泌抗E蛋白的單克隆抗體細胞株1C5和3B11。制備的單克隆抗體與原核表達和病毒感染細胞中的E蛋白均能反應。進一步通過轉染截短蛋白E不同區(qū)域截短體與pEGFP-C3構建的重組載體,并經(jīng)IFA檢測,發(fā)現(xiàn)單克隆抗體1C5和3B11識別的截短E抗原區(qū)域位于C端35個氨基酸(105個堿基)之間。本研究為進一步研究坦布蘇病毒E蛋白的功能,研制坦布蘇病毒病亞單位疫苗以及建立快速特異的坦布蘇病毒檢測方法奠定了基礎。
[Abstract]:In order to prepare monoclonal antibody against E protein truncated protein and analyze its antigenicity, the cDNA of Tambusuvirus YY1 isolate was used as template. The gene encoding truncated E protein was amplified by RT-PCR. It was successfully cloned into prokaryotic expression vector pET-28a (). The recombinant vector pET-28a (pET-28a) was transformed into E. coli BL21pLysS. The recombinant protein His-YY1E was highly expressed under the induction of IPTG. The protein can react with the serum of tambusuvirus infected duck and immunize mice with purified His-YY1E to prepare monoclonal antibody. After three rounds of screening and identification by limited dilution method, two monoclonal antibody cell lines 1C5 and 3B1111 secreting anti-E protein were obtained. The prepared monoclonal antibodies were associated with prokaryotic expression and E. The recombinant vector was constructed by transfection of truncated bodies in different regions of truncated protein E and pEGFP-C3. And detected by IFA. The truncated E antigen region recognized by monoclonal antibodies 1C5 and 3B11 was found to be between 35 amino acids (105 bases) at the C-terminal. The preparation of TBV subunit vaccine and the establishment of a rapid and specific detection method for TBV have laid a foundation.
【作者單位】： 浙江大學農(nóng)業(yè)部動物病毒學重點實驗室;
【基金】：國家科技支撐計劃項目(2015BAD12B01)
【分類號】：S852.65
【正文快照】： 坦布蘇病毒(Tem busu virus,TM U V)是禽坦布蘇病毒病的病原。2010年4月,在我國南方養(yǎng)鴨業(yè)比較密集的福建、江浙一帶首先暴發(fā)了一種以蛋鴨產(chǎn)蛋急劇下降為主要臨床特征、出血性卵巢炎為主要病理變化特征的傳染病[1]。該病傳播快、發(fā)病率高,給我國沿海地區(qū)養(yǎng)鴨業(yè)帶來了嚴重的經(jīng)

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