本文關(guān)鍵詞：牦牛發(fā)情周期中Ovn在輸卵管的表達及EGF對其表達的影響　出處：《甘肅農(nóng)業(yè)大學》2016年碩士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】：輸卵管蛋白(Ovn)具有促進受精和早期胚胎發(fā)育的作用,但有關(guān)Ovn分子特征及其在發(fā)情周期表達的研究甚少。本研究采用RT-PCR法克隆了牦牛Ovn cDNA序列,并采用qRT-PCR和免疫組織化學方法檢測了在卵泡期前期、卵泡期后期、黃體期前期及黃體期后期輸卵管傘部和壺腹部Ovn的表達差異,從基因和蛋白水平分析牦牛發(fā)情周期輸卵管中Ovn表達的變化。在此基礎(chǔ)上,通過對牦牛輸卵管上皮細胞體外培養(yǎng)中加入不同濃度的EGF,運用qRT-PCR檢測了Ovn、HIF-1α、Bcl-2和Bax mRNA的表達,從而探討了EGF對牦牛輸卵管上皮細胞分泌的調(diào)控作用。研究結(jié)果表明:(1)牦牛Ovn cDNA序列與黃牛(Bos taurus)和印度水牛(Bubalus bubalis)具有很高的同源性;氨基酸序列比對進化樹表明,牦牛Ovn與黃牛的同源性最高,達到99.1%;成功克隆出牦牛Ovn的cDNA序列,GenBank登錄號:KF303541。(2)卵泡期后期Ovn mRNA的表達最高,黃體期前期和黃體期后期表達依次減少,卵泡期前期階段相對表達量最低;蛋白免疫標記在卵泡期后期和黃體期前期階段較明顯,其他階段則減弱;壺腹部和傘部Ovn mRNA的表達差異不顯著。(3)原代牦牛輸卵管上皮細胞貼壁時間和生長比較慢,Ovn主要分布在細胞質(zhì)中;90%FBS+10%DMSO的凍存效果優(yōu)于傳統(tǒng)方法。(4)牦牛輸卵管上皮細胞體外培養(yǎng)中添加EGF可提高輸卵管上皮細胞Ovn、HIF-1α和Bcl-2 mRNA的表達,降低Bax mRNA的表達,且其作用濃度具有劑量依賴性,最佳濃度為50 ng?m L-1。本研究得到了包含完整開放閱讀框的牦牛Ovn的cDNA序列,明確了發(fā)情周期中不同階段Ovn mRNA表達的差異性,并發(fā)現(xiàn)EGF可能是通過調(diào)控HIF-1α抑制輸卵管上皮細胞的凋亡、促進Ovn分泌。研究結(jié)果為進一步揭示EGF在輸卵管上皮細胞對卵母細胞成熟及早期胚胎發(fā)育過程中的作用機制提供了理論依據(jù),有助于牦牛胚胎體外發(fā)育技術(shù)改進。
【學位授予單位】：甘肅農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S823.85

【參考文獻】

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