本文關(guān)鍵詞：雞LEAP-2抗菌肽基因的克隆及蛋白的表達(dá)和純化

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【摘要】：抗菌肽LEAP-2 (liver expressed antimicrobial peptide-2, LEAP-2)是自然界里天然的抗生素,能夠殺滅的細(xì)菌種類分布范圍大,還擁有抑制真菌,腫瘤細(xì)胞與病毒的功能。但它多數(shù)動(dòng)物細(xì)胞沒有毒性,所以有很好的研究前景和意義。這些年關(guān)于家禽的LEAP-2的相關(guān)探索才剛開始,本課題主要研究雞的LEAP-2.本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用了網(wǎng)上生物信息軟件對(duì)雞LEAP-2基因和蛋白序列進(jìn)行分析,本研究在體外使用了原核表達(dá)體系制備雞抗菌肽LEAP-2�；陔u抗菌肽LEAP-2 mRNA的已知序列(序列號(hào)：NM 001001606)來設(shè)計(jì)一對(duì)引物,同時(shí)以肉雞肝臟總RNA為模板擴(kuò)增出了LEAP-2 CDS區(qū)的序列,構(gòu)建了pGEX-6P-1-LEAP-2的重組質(zhì)粒,用此轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21來進(jìn)行了誘導(dǎo)表達(dá)、純化及SDS-PAGE、Western Blot檢測(cè),對(duì)純化后的融合蛋白進(jìn)行了融合頭的切割,對(duì)融合蛋白GST-LEAP-2和雞抗菌肽LEAP-2進(jìn)行體外抗菌活性檢測(cè)。結(jié)果：成功構(gòu)建了融合表達(dá)載體pGEX-6P-LEAP-2,并成功地表達(dá)了雞LEAP-2融合蛋白；融合表達(dá)產(chǎn)物對(duì)金黃色葡萄球菌和大腸桿菌有一定的抑菌作用,融合蛋白經(jīng)切割后產(chǎn)生的雞抗菌肽LEAP-2顯示出更強(qiáng)的抗菌活性。結(jié)論：生物信息學(xué)的分析為進(jìn)一步探究雞抗菌肽LEAP-2的其他功能和后續(xù)的實(shí)驗(yàn)提供了相關(guān)的理論依據(jù)；成功地構(gòu)建了雞LEAP-2的融合表達(dá)體系,目的蛋白大小在8KD左右,體外抗菌活性檢測(cè)表現(xiàn)出一定的抗菌活性,為研究在其他動(dòng)物身上類似的抗菌肽提供了研究基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：山西農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S831

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5 廖富，

本文編號(hào)：1293694