發(fā)布時間：2017-12-02 02:08

  本文關(guān)鍵詞：多表位重組抗原的研制及在日本血吸蟲病診斷和免疫預(yù)防上的初步應(yīng)用

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【摘要】：日本血吸蟲病(schistosomiasis)仍然是我國重要的公共衛(wèi)生問題之一。病牛是我國血吸蟲病最重要的傳染源,在某些流行區(qū)內(nèi)羊在血吸蟲病傳播中的作用也不可忽視,有效控制牛、羊血吸蟲病對我國早日阻斷血吸蟲病傳播將有重大的意義。診斷是血吸蟲病防控中的中心環(huán)節(jié)。在現(xiàn)已建立的各種血清學(xué)診斷技術(shù)中,血吸蟲蟲卵可溶性抗原SEA是最常用的診斷抗原,但以SEA作為診斷抗原,往往特異性較差,交叉反應(yīng)高,不能區(qū)分現(xiàn)癥感染和既往感染以及不能作為療效考核的診斷抗原。一些血吸蟲重組抗原已被用作診斷抗原或疫苗候選分子,評估其應(yīng)用前景,但大多數(shù)重組抗原獲得的敏感性都低于SEA,誘導(dǎo)的保護(hù)效果都不夠高或不穩(wěn)定。多表位重組抗原含有多個抗原表位有可能增強(qiáng)其抗原性和免疫原性,把它們作為診斷抗原或疫苗候選分子,有可能提高診斷方法的敏感性和疫苗的免疫保護(hù)效果�；诖�,本文開展了以下幾個方面的研究:1.候選抗原SjPGM和SjRAD23細(xì)胞表位的分析及單分子和多表位重組抗原的構(gòu)建應(yīng)用BepiPred 1.0、T-epitope Designer、PredictProtein、IEDB Analysis等在線預(yù)測軟件預(yù)測候選抗原SjPGM和SjRAD23的B細(xì)胞和T細(xì)胞表位及候選抗原肽段的抗原性、可接近性等,綜合各個預(yù)測軟件的分析結(jié)果,篩選出表位富集肽段三段,包括從SjPGM挑選出的BSjPGM(aa 85-166);Sj RAD23挑選出的BSj RAD23-1(aa 46-123)和BSjRAD23-2(aa 166-230)。另Sj23抗原的大親水區(qū)(LHD-Sj23)也被引入作為候選表位富集肽段。設(shè)計特異性引物,共構(gòu)建了9種重組原核表達(dá)質(zhì)粒,其中包括4種單分子重組表達(dá)質(zhì)粒:BSjPGM/p ET-28a(+)、BSj RAD23-1/pET-28a(+)、BSjRAD23-2/p ET-28a(+)、BSj23/p ET-32a(+)和5種多表位重組表達(dá)質(zhì)粒:BSjPGM-BSj23/p ET-28a(+)、BSjPGM-BSj RAD23-1/pET-28a(+)、BSjPGM-BSjRAD23-1-BSj23/pET-28a(+)、BSj RAD23-2-BSjPGM-BSj23/p ET-28a(+)和BSj RAD23-2-BSjPGM/pET-28a(+)。除BSjPGM/p ET-28a(+)、BSjRAD23-2/p ET-28a(+)、BSj RAD23-2-BSjPGM/pET-28a(+)外,其余6種重組表達(dá)質(zhì)粒均成功在大腸桿菌中表達(dá),并經(jīng)純化獲得條帶單一的目的蛋白。2.單分子/多表位重組抗原用于診斷山羊血吸蟲病的初步研究以重組抗原rSjPGM和rSj RAD23及新構(gòu)建的6種表位重組蛋白作為診斷抗原,以sea作為參照抗原,應(yīng)用間接elisa方法檢測山羊日本血吸蟲病,共檢測91份山羊感染日本血吸蟲血清,44份健康山羊血清,12份捻轉(zhuǎn)血矛線蟲感染血清及37份東畢吸蟲感染血清。結(jié)果顯示,除rbsjpgm-bsjrad23-1外,其余3種多表位重組抗原獲得的敏感性都高于4種單分子重組抗原(rsjrad23,rsjpgm,rbsjrad23-1,rbsj23),其中多表位重組抗原rbsjpgm-bsjrad23-1-bsj23獲得最高的敏感性(97.8%,89/91),且保持良好的特異性(100%,44/44)和較低的交叉反應(yīng)性(捻轉(zhuǎn)血矛線蟲:8.33%,1/12;東畢吸蟲13.51%,5/37)。而以sea作為診斷抗原,其敏感性為100%(91/91),但特異性僅為75%(33/44),且與捻轉(zhuǎn)血矛線蟲和東畢吸蟲分別有25%(3/12)和83.78%(31/37)的交叉反應(yīng)。本研究結(jié)果顯示,多表位重組抗原的研制與應(yīng)用有可能提高重組抗原檢測山羊血吸蟲病的敏感性,多表位重組抗原rbsjpgm-bsjrad23-1-bsj23有可能是一種診斷山羊血吸蟲病的優(yōu)選抗原。3.單分子/多表位重組抗原用于診斷水牛血吸蟲病的效果評估將在診斷山羊血吸蟲病中顯示出較好效果的5種重組表位抗原,包括2種單分子表位抗原(rbsjrad23-1,rbsj23)和3種多表位重組抗原(rbsjpgm-bsj23、rbsjpgm-bsjrad23-1-bsj23、rbsjrad23-2-bsjpgm-bsj23),用于診斷水牛血吸蟲病,同樣以sea作為參照抗原。共檢測114份日本血吸蟲感染水牛血清,92份健康水牛血清,14份前后盤吸蟲感染血清。elisa結(jié)果顯示,5種重組表位抗原中rbsjpgm-bsjrad23-1-bsj23獲得最高的敏感性(95.61%,109/114),其特異性和交叉反應(yīng)率分別為97.83%(90/92)和7.14(2/14)。而以sea作為診斷抗原,獲得的敏感性為100%,特異性和交叉反應(yīng)率分別為82.61%(76/92)和50%(7/14)。本研究結(jié)果顯示,多表位重組抗原的研制與應(yīng)用可以提高重組抗原檢測水牛血吸蟲病的敏感性。同樣,多表位重組抗原rbsjpgm-bsjrad23-1-bsj23是水牛血吸蟲病的優(yōu)選診斷抗原。4.表位重組抗原誘導(dǎo)免疫保護(hù)效果的初步評價在抗原表位分析基礎(chǔ)上,本研究構(gòu)建了一重組表達(dá)質(zhì)粒bsjrad23-2-bsjpgm-bsjrad23-1/pet-28a(+),將三種重組表位抗原rbsjrad23-1,rbsjpgm-bsjrad23-1,rbsjrad23-2-bsjpgm-bsjrad23-1結(jié)合206佐劑免疫小鼠,結(jié)果在兩批獨(dú)立的動物實(shí)驗中,rbsjrad23-2-bsjpgm-bsjrad23-1在小鼠中誘導(dǎo)的減蟲率(42.7%,30.4%)和減卵率(40.3%,30.3%)均高于另兩種表位重組抗原,本研究提示構(gòu)建多表位重組抗原可提高重組抗原誘導(dǎo)的免疫保護(hù)效果。本研究研制了一種在牛、羊血吸蟲病診斷中具有較高敏感性和特異性的重組多表位診斷抗原r BSj RAD23-2-BSjPGM-BSj RAD23-1,并建立了ELISA檢測技術(shù),為我國家畜血吸蟲病防控提供了一種可選擇的診斷新技術(shù)。
【學(xué)位授予單位】：上海師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S855.9

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1 K.S.Johnson;晁毓放;;用重組抗原免疫預(yù)防羊的囊蟲病[J];國外獸醫(yī)學(xué).畜禽疾病;1990年02期

2 唐雨德,顧志香,劉玉,周宗安,羅涵祿,郁興明,陶開華,翟春生;豬囊蟲病基因工程疫苗的生產(chǎn)工藝研究[J];中國獸醫(yī)科技;2000年10期

3 翟春生,唐雨德,顧志香;應(yīng)用重組抗原預(yù)防豬囊蟲病[J];中國獸醫(yī)學(xué)報;1998年04期

4 ;[J];;年期

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1 楊培梁;弓形蟲多表位基因的疫苗研究及其重組抗原在免疫診斷中的應(yīng)用[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2007年

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1 呂士玉;細(xì)粒棘球蚴重組抗原Eg10和mMDH致樹突狀細(xì)胞免疫耐受的機(jī)制研究[D];寧夏醫(yī)科大學(xué);2015年

2 呂超;多表位重組抗原的研制及在日本血吸蟲病診斷和免疫預(yù)防上的初步應(yīng)用[D];上海師范大學(xué);2016年

3 吳守麗;漢坦病毒基因分型和應(yīng)用重組抗原進(jìn)行HFRS抗體快速檢測的研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2005年

4 姚永偉;弓形蟲重組抗原P22的制備及應(yīng)用[D];南京醫(yī)科大學(xué);2004年

5 劉娟;梅毒螺旋體TpN17重組抗原的表達(dá)、純化及鑒定[D];昆明理工大學(xué);2006年

6 棘懷慶;細(xì)粒棘球蚴（中國大陸株）重組抗原Eg14-3-3免疫保護(hù)力及免疫機(jī)制的研究[D];寧夏醫(yī)科大學(xué);2010年

7 羅永云;細(xì)粒棘球蚴重組抗原EgP-29免疫小鼠的動態(tài)研究[D];寧夏醫(yī)科大學(xué);2009年

8 王強(qiáng);細(xì)粒棘球蚴重組抗原鐵蛋白和Eg10對小鼠骨髓來源樹突狀細(xì)胞的影響[D];寧夏醫(yī)科大學(xué);2014年

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本文編號：1243250