本文關鍵詞：牛結核病皮內(nèi)變態(tài)反應檢測抗原的篩選及應用研究

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【摘要】：牛結核病(Bovine tuberculosis)是一種由牛結核分支桿菌(Mycobacterium bovis)等引起的以呼吸道系統(tǒng)感染為主的人畜共患慢性消耗性傳染病。由于牛結核分支桿菌擁有廣泛的宿主,牛是最敏感的宿主之一,人們經(jīng)由未經(jīng)消毒的病牛奶就可被結核菌感染,而人結核病又可以傳染給牛,因此,人畜之間的交叉感染是造成結核病廣泛流行傳播的重要原因。這是國內(nèi)外迫切要解決的一個非常嚴重的公共安全問題。現(xiàn)階段,“檢疫—撲殺”是國內(nèi)外對于牛結核病防控的主要措施,及時準確地診斷牛結核病是防控牛結核病的重中之重。結核菌素試驗(Tuberculin test,TST)是OIE推薦使用的檢測牛結核病的方法,這種檢測方法是基于Ⅳ型變態(tài)反應的一種以結核菌素的純化蛋白衍生物(purified protein derivative,PPD)或舊結核菌素(OT)為抗原誘發(fā)遲發(fā)型細胞超敏反應的皮內(nèi)檢測方法。牛結核菌素(PPD-B)是由分支桿菌培養(yǎng)物滅活提純得到,生產(chǎn)過程需要牛分支桿菌強毒株,存在散毒危險,并與禽結核菌素(PPD-A)、環(huán)境中廣泛存在的分支桿菌、BCG存在共同抗原,再因其是多種蛋白、脂類和糖的混合物,定性定量困難,批次間的穩(wěn)定性難以保持,試驗中個體的免疫能力還會影響PPD的應答水平。當然,除結核菌素皮試以外還有,如抗體檢測法、IFN-γ體外釋放法等來診斷牛結核病,但這些方法的關鍵之一就是選擇最為靈敏的特異性反應抗原來輔助診斷。因此,用PPD來作為診斷抗原,其特異性較差,容易出現(xiàn)假陽性的診斷結果,并且牛分支桿菌感染機體過程中分泌多種抗原,使用單個抗原檢測靈敏度低,而重組牛分支桿菌特異性蛋白成份明確、易于質控、特異性較高且無生物安全隱患等優(yōu)點。所以,為提高檢測的特異性,排除部分分支桿菌感染和BCG接種后的干擾,有必要開發(fā)特異性強的重組基因抗原。鑒于以上原因,本研究采用皮內(nèi)變態(tài)反應為基礎的實驗方法,用卡介苗(BCG)和新金分支桿菌、草分支桿菌、副結核分支桿菌等不同的分支桿菌來免疫豚鼠,用純化出的重組融合蛋白MPB70-64、MPB83-70-63-64、MPB83-70-ESAT6-CFP10、ESAT6-CFP10、MPB51-63和MPB63-64,以及PPD對54只免疫豚鼠誘發(fā)DTH反應,測量數(shù)值后進行差異性對比,篩選出MPB70-64、MPB83-70-63-64、MPB83-70-ESAT6-CFP10及ESAT6-CFP10四種特異性較高的重組融合蛋白,因MPB83-70-63-64與其他三種重組抗原對比,其具有更高的特異性,故應用MPB83-70-63-64作為反應原對212頭牛進行了皮內(nèi)變態(tài)反應檢測,并與PPD對比,顯示以MPB83-70-63-64作為皮內(nèi)變態(tài)反應檢測抗原,檢出的結核陽性牛和疑似陽性牛的頭數(shù)均低于PPD作為反應原檢出的頭數(shù),表明該抗原提高了牛結核檢測的特異性。因此,MPB83-70-63-64有望作為牛結核病變態(tài)反應檢測抗原,在牛結核病的防制中發(fā)揮作用。
【學位授予單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S858.23

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本文編號：1241270