本文關(guān)鍵詞：瀏陽黑山羊瘤胃上皮細(xì)胞周期分布、增殖和凋亡特點(diǎn)

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【摘要】：本研究旨在建立瀏陽黑山羊瘤胃上皮細(xì)胞的體外培養(yǎng)模型,并對其周期分布、增殖和凋亡特點(diǎn)進(jìn)行研究。試驗(yàn)采集60日齡瀏陽黑山羊的瘤胃上皮組織,應(yīng)用0.25%胰蛋白酶+0.02%乙二胺四乙酸(EDTA)消化法對山羊瘤胃上皮組織進(jìn)行消化,得到單個(gè)的山羊瘤胃上皮原代細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)。通過倒置顯微鏡對原代和傳代培養(yǎng)階段細(xì)胞形態(tài)進(jìn)行觀察,采用細(xì)胞計(jì)數(shù)法檢測細(xì)胞的生長活性,應(yīng)用細(xì)胞免疫組化學(xué)方法對傳代細(xì)胞進(jìn)行鑒定,并用流式細(xì)胞術(shù)檢測山羊瘤胃上皮傳代細(xì)胞周期分布情況和凋亡比率。結(jié)果顯示:1)經(jīng)0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA消化獲得的山羊瘤胃上皮原代細(xì)胞,培養(yǎng)1 d開始貼壁生長,2 d開始生長較快(對數(shù)期),呈典型的"波峰"狀生長,3~4 d生長最為迅速,7 d生長速度平穩(wěn)(平臺期)。2)經(jīng)細(xì)胞免疫組化學(xué)方法的鑒定,細(xì)胞胞漿為黃褐色,即細(xì)胞角蛋白19呈陽性表達(dá)。3)膜聯(lián)蛋白-V/碘化丙啶聯(lián)合染色顯示,隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長,細(xì)胞凋亡比率顯著增加(P0.01)。結(jié)果表明,通過0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA的消化方法成功得到了瀏陽黑山羊瘤胃上皮細(xì)胞,可為今后研究反芻動物瘤胃相關(guān)機(jī)制與功能提供模型。
【作者單位】： 湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院畜禽遺傳改良湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;中國科學(xué)院亞熱帶農(nóng)業(yè)生態(tài)研究所亞熱帶農(nóng)業(yè)生態(tài)過程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室湖南省畜禽健康養(yǎng)殖工程技術(shù)中心農(nóng)業(yè)部中南動物營養(yǎng)與飼料科學(xué)觀測實(shí)驗(yàn)站;
【基金】：國家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(31372342) 國家科技支撐計(jì)劃課題(2012BAD14B17) 中國科學(xué)院科技服務(wù)網(wǎng)絡(luò)計(jì)劃(STS計(jì)劃)課題(KFJ-EW-STS-071)
【分類號】：S827
【正文快照】：

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本文編號：1237507