本文關鍵詞：牛布魯氏菌病熒光標記免疫層析試紙條檢測技術研究

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【摘要】：布魯氏菌病是一種流行范圍廣、危害嚴重的人畜共患傳染病。近年來,由布魯氏菌感染導致的人畜疫情在國內外均出現回升勢頭,嚴重影響了養(yǎng)殖產業(yè)發(fā)展,并引發(fā)嚴重的公共衛(wèi)生問題。該病的快速準確檢測可為疫病防治提供有效的疫病信息,是布魯氏菌病早期防控的關鍵。鑒于此,建立一種快速和有效的檢測方法十分必要。首先將布魯氏菌pCold-TF/OMP19、pCold-TF/OMP22和pCold-TF/OMP28重組質粒轉化到E.coli BL21(DE3)感受態(tài)細胞進行表達,通過親和層析純化,獲得高純度可溶性重組蛋白OMP19、OMP22和OMP28。然后采用ELISA方法對這三種重組蛋白進行驗證,表明三種蛋白組合能與牛布魯氏菌病標準陽性血清發(fā)生較好的特異性反應；之后,利用純化的融合抗原,通過對各種固相材料的選擇和反應體系及反應條件的優(yōu)化,建立了一種基于熒光標記抗體的牛布魯氏菌病免疫層析試紙條檢測方法,并應用于牛布魯氏菌病抗體的快速檢測中。熒光標記的牛布魯氏菌病免疫層析試紙條最低能檢測到1：100的稀釋度；與牛的結核病、藍舌病、病毒性腹瀉、口蹄疫、巴氏桿菌病、白血病,不發(fā)生交叉反應；應用該試紙條與商品化的IDEXX試劑盒對200份臨床樣本進行檢測比較,結果與IDEXX試劑盒的符合率為93.5%。本試驗建立的牛布魯氏菌病熒光標記免疫層析試紙條方法,具有良好的特異性、敏感性和重復性,能快速檢測出牛血清中的布魯氏菌病抗體,是一種適合現場初篩的檢測方法。
【學位授予單位】：內蒙古農業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S858.23

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