本文關(guān)鍵詞：沼澤型水牛VASA基因啟動(dòng)子的克隆及轉(zhuǎn)錄活性檢測(cè)

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【摘要】：【目的】克隆沼澤型水牛VASA基因5′側(cè)翼序列,對(duì)啟動(dòng)子進(jìn)行生物信息學(xué)分析及轉(zhuǎn)錄活性檢測(cè),為后續(xù)水牛繁殖性能的分子機(jī)理研究奠定基礎(chǔ)�！痉椒ā扛鶕�(jù)GenBank已公布的河流型水牛(Bubalus bubalis)的VASA5′側(cè)翼序列,經(jīng)過同源比對(duì),設(shè)計(jì)PCR引物。以沼澤型水牛血液基因組為模板擴(kuò)增VASA基因5′側(cè)翼序列并進(jìn)行測(cè)序和生物信息學(xué)分析。將擴(kuò)增的VASA基因5′側(cè)翼片段插入pEGFP-1多克隆位點(diǎn)處,構(gòu)建pVASA-EGFP-1載體。載體經(jīng)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染HEK-293T和CHO細(xì)胞系,分析其轉(zhuǎn)錄活性。【結(jié)果】成功克隆沼澤型水牛VASA 5′側(cè)翼序列及部分CDS區(qū)序列,共3 081bp,同源性分析表明,沼澤型水牛VASA基因5′側(cè)翼序列與河流型水牛、黃牛、綿羊、山羊、小鼠和人的相似性分別為99%,96%,93%,95%,90%和79%。對(duì)其5′側(cè)翼序列2 000bp進(jìn)行啟動(dòng)子預(yù)測(cè)及轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)預(yù)測(cè),發(fā)現(xiàn)在其翻譯起始位點(diǎn)上游-635--586處存在TATA box,啟動(dòng)子區(qū)存在Nobox、Stat1、Stat3、Stat4、Stat5a、Stat5b、Stat6、Gata3、Smad2、Smad3和Smad4等反式作用因子結(jié)合位點(diǎn),其中Stat家族基因在VASA啟動(dòng)子區(qū)存在多個(gè)結(jié)合位點(diǎn),且同一位點(diǎn)又存在多個(gè)Stats基因結(jié)合的情況。水牛VASA啟動(dòng)子能啟動(dòng)EGFP在HEK-293T細(xì)胞中的表達(dá),但非常微弱;能啟動(dòng)EGFP在CHO細(xì)胞中表達(dá),且啟動(dòng)活性與CMV啟動(dòng)子相似。【結(jié)論】成功克隆了沼澤型水牛VASA基因啟動(dòng)子,分析了其啟動(dòng)子序列特征并成功驗(yàn)證其組織特異性和轉(zhuǎn)錄活性。
【作者單位】： 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院廣西水牛研究所廣西水牛遺傳繁育重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： 沼澤型水牛 VASA基因 生物信息學(xué)分析 轉(zhuǎn)錄活性
【基金】：農(nóng)業(yè)部轉(zhuǎn)基因重點(diǎn)項(xiàng)目(2014ZX08010-012B) 廣西科技攻關(guān)國際交流與合作項(xiàng)目(桂科合14123001-5) 廣西水牛研究所基本業(yè)務(wù)費(fèi)項(xiàng)目(水�；�160206)
【分類號(hào)】：S823.83;Q78
【正文快照】： 水牛具有適應(yīng)性強(qiáng)、耐高溫高濕、耐粗飼、抗病力強(qiáng)、使用年限長、靜默發(fā)情、繁殖力低和產(chǎn)奶量低等生物學(xué)特點(diǎn),非常適合于我國南方地區(qū)養(yǎng)殖[1-2]。近年來,隨著生活水平的提高,人們對(duì)水牛肉和水牛奶的需求日益增加,但是水牛繁殖力低嚴(yán)重制約了該產(chǎn)業(yè)的發(fā)展,而造成這一現(xiàn)狀的主要，

本文編號(hào)：1136158