發(fā)布時間：2017-10-20 21:16

  本文關鍵詞：動物雙歧桿菌對小鼠腸道黏膜損傷的緩解作用及其機理研究

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【摘要】：腸道是機體消化吸收營養(yǎng)物質(zhì)的主要場所,同時還具有屏障作用。正常腸道屏障功能應包括腸黏膜上皮屏障、腸道免疫系統(tǒng)、腸道菌群和腸道內(nèi)分泌,其中最重要的為腸黏膜上皮屏障。損傷的腸道黏膜層通透性增加,導致家畜免疫力降低,腸道菌群紊亂,極易引發(fā)腸道炎癥性疾病,降低其生產(chǎn)性能甚至死亡。雙歧桿菌作為典型的腸道益生菌,不僅能夠在家畜腸道內(nèi)定植調(diào)節(jié)腸道菌群,抑制有害菌的繁殖,還具有預防和治療腹瀉、提高機體免疫力等功能特性。本研究通過建立小鼠潰瘍性結腸炎模型,觀察動物雙歧桿菌A6對小鼠腸道黏膜組織損傷的預防和緩解作用,及其對小鼠腸黏膜免疫系統(tǒng)平衡、緊密連接蛋白表達量和腸道菌群的影響,從分子水平上闡明益生菌改善腸道黏膜損傷的機制。以BALB/c小鼠UC為實驗模型,分為正常組、模型組、葡聚糖硫酸鈉+1×1010cfu/ml BAA6干預組、葡聚糖硫酸鈉+1×108cfu/ml BAA6干預組和葡聚糖硫酸鈉+1×106cfu/ml BAA6干預組。結果表明,UC模型組小鼠結腸腸道黏膜上皮損傷嚴重,預先口服BAA6菌株的UC小鼠呈現(xiàn)出不同程度好轉(zhuǎn),呈劑量依賴性,小鼠結腸長度縮短程度明顯減少(P0.05),結腸炎疾病活動指數(shù)、髓過氧化物酶活力均顯著低于模型組(P0.05),維持Th1/Th2細胞平衡和腸道菌群狀態(tài),C laudin-2、 STAT6、GATA4、Cdx2表達量較模型組顯著減少(P0.05)。口服適量BAA6對小鼠腸道黏膜損傷具有預防作用,其機制可能是通過維持Th1/Th2細胞平衡,減少Th1細胞因子IL-13的分泌量,抑制STAT6通路和GATA4、Cdx2的激活,降低Claudin-2表達量,從而達到降低腸道通透性、減輕小鼠結腸黏膜損傷的目的,同時還具有維持腸道菌群平衡的作用,有利于恢復腸道屏障功能。
【關鍵詞】：腸道黏膜 潰瘍性結腸炎 雙歧桿菌BAA6 緊密連接蛋白 腸道菌群
【學位授予單位】：河北工程大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S816;S856.4
【目錄】：

• 摘要5-6
• Abstract6-11
• 第1章 緒論11-17
• 1.1 腸道屏障功能的研究進展11-12
• 1.2 緊密連接蛋白研究現(xiàn)狀12-13
• 1.2.1 緊密連接蛋白介紹12
• 1.2.2 緊密連接改變與腸道疾病關系12-13
• 1.2.3 緊密連接蛋白與腸道免疫屏障作用關系13
• 1.3 腸道菌群研究進展13-15
• 1.3.1 腸道菌群介紹13-14
• 1.3.2 腸道菌群功能及影響因素14
• 1.3.3 腸道菌群與腸道黏膜損傷關系14-15
• 1.4 益生菌研究進展15-16
• 1.4.1 益生菌介紹15
• 1.4.2 益生菌對腸道黏膜的影響15-16
• 1.5 本研究的目的及意義16
• 1.6 技術路線16-17
• 第2章 動物雙歧桿菌A6對結腸炎小鼠腸道屏障損壞預防作用的研究17-29
• 2.1 試驗材料17-18
• 2.1.1 試驗動物與菌株17
• 2.1.2 主要試劑17
• 2.1.3 主要試劑的配制17-18
• 2.1.4 主要儀器18
• 2.2 試驗方法18-21
• 2.2.1 菌株的活化及收集18
• 2.2.2 急性潰瘍性結腸炎小鼠模型的建立與分組18-19
• 2.2.3 結腸炎小鼠生長狀況的觀察測定19
• 2.2.4 結腸炎疾病活動指數(shù)(disease activity index，DAI)19
• 2.2.5 小鼠結腸大體情況及長度變化19
• 2.2.6 結腸病理切片及HE染色19-20
• 2.2.7 腸道組織病理學評分20-21
• 2.2.8 髓過氧化物酶(MPO)活性測定21
• 2.2.9 統(tǒng)計學處理21
• 2.3 試驗結果21-26
• 2.3.1 小鼠體重變化情況21-22
• 2.3.2 小鼠結腸情況及長度變化22-23
• 2.3.3 小鼠結腸炎疾病活動指數(shù)(DAI)變化23
• 2.3.4 小鼠結腸組織學損傷評分變化情況23-25
• 2.3.5 各組小鼠髓過氧化物酶含量變化情況25-26
• 2.4 討論26-27
• 2.5 本章小結27-29
• 第3章 動物雙歧桿菌A6對小鼠腸道屏障損壞預防作用機制的研究29-43
• 3.1 試驗材料29-30
• 3.1.1 主要試劑29
• 3.1.2 主要儀器29-30
• 3.2 試驗方法30-34
• 3.2.1 總RNA的抽提及逆轉(zhuǎn)錄30-31
• 3.2.2 檢測結腸組織中緊密連接蛋白Claudin-2 的表達水平31-32
• 3.2.3 酶聯(lián)免疫吸附法測定結腸組織細胞因子表達水平32-33
• 3.2.4 Real-time PCR法檢測結腸組織中STAT6的m RNA表達量33
• 3.2.5 Real-time PCR法檢測結腸組織中轉(zhuǎn)錄因子GATA4、CDX2的mRNA表達量33-34
• 3.2.6 統(tǒng)計學處理34
• 3.3 試驗結果34-40
• 3.3.1 緊密連接蛋白Claudin-2 表達水平變化34-36
• 3.3.2 細胞因子ELISA數(shù)據(jù)結果36-39
• 3.3.3 小鼠結腸組織中STAT6的mRNA表達水平變化39-40
• 3.3.4 小鼠結腸組織中轉(zhuǎn)錄因子GATA4和CDX2的mRNA表達水平變化40
• 3.4 討論40-42
• 3.5 本章小結42-43
• 第4章 動物雙歧桿菌A6對小鼠腸道菌群平衡恢復的研究43-57
• 4.1 試驗材料43-44
• 4.1.1 主要試劑43
• 4.1.2 主要試劑溶液的配制43
• 4.1.3 主要儀器43-44
• 4.2 試驗方法44-47
• 4.2.1 小鼠糞便基因組總DNA的提取44-45
• 4.2.2 腸道菌群PCR引物及特異性檢測45
• 4.2.3 獲取目的菌屬的標準DNA模板45-46
• 4.2.4 目的菌屬標準DNA模板濃度測定46
• 4.2.5 各目的菌屬RT-PCR標準曲線的建立46
• 4.2.6 RT-PCR法檢測小鼠糞便中腸道菌群的數(shù)量46-47
• 4.2.7 統(tǒng)計學處理47
• 4.3 試驗結果47-54
• 4.3.1 小鼠糞便樣品中總DNA提取結果47-48
• 4.3.2 目的菌株標準DNA模板濃度測定結果48
• 4.3.3 引物特異性的驗證結果48-50
• 4.3.4 目的菌屬定量PCR標準曲線的建立50-51
• 4.3.5 小鼠糞便樣品中腸道菌群含量的測定結果51-54
• 4.4 討論54-55
• 4.5 本章小結55-57
• 結論57-59
• 致謝59-61
• 參考文獻61-67
• 作者簡介67
• 攻讀碩士學位期間發(fā)表的論文67
• 攻讀碩士學位期間參研的項目67-68

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本文編號：1069411