本文關鍵詞：FAK信號通路調控豬骨骼肌衛(wèi)星細胞遷移和粘附的分子機制

  更多相關文章： FAK 豬骨骼肌衛(wèi)星細胞 細胞遷移 粘著斑 F-肌動蛋白

【摘要】：為研究不同品種豬骨骼肌衛(wèi)星細胞遷移和粘附差異的分子機制,本試驗以華南地方品種藍塘豬和外來品種長白豬背最長肌的骨骼肌衛(wèi)星細胞為試驗材料,利用細胞劃痕試驗和transwell小室遷移試驗,比較兩品種豬骨骼肌衛(wèi)星細胞的遷移能力;細胞外基質(Fn)-細胞粘附試驗,比較兩品種豬骨骼肌衛(wèi)星細胞的粘附能力;運用細胞免疫熒光技術,檢測兩品種豬骨骼肌衛(wèi)星細胞粘著斑和F-肌動蛋白的表達;采用Western blot技術,檢測兩種衛(wèi)星細胞遷移24 h和粘附2 h時間點FAK/paxillin信號通路的蛋白表達情況,結合實時熒光定量PCR技術檢測兩種衛(wèi)星細胞粘附2 h時整合素(ITGB)關鍵基因的表達;同時以藍塘豬骨骼肌衛(wèi)星細胞為材料,選用p-FAK特異性抑制劑PF-573228,分別以0、5和10μmol/L濃度處理藍塘豬骨骼肌衛(wèi)星細胞24 h,檢測其對衛(wèi)星細胞遷移和粘附的影響,以及粘著斑、F-肌動蛋白和FAK信號通路相關蛋白的表達變化。試驗結果如下:(1)細胞劃痕試驗和transwell小室遷移試驗表明,藍塘豬骨骼肌衛(wèi)星細胞的遷移能力顯著強于長白豬骨骼肌衛(wèi)星細胞(P0.05);細胞外基質-細胞粘附試驗表明,藍塘豬骨骼肌衛(wèi)星細胞的粘附能力顯著強于長白豬骨骼肌衛(wèi)星細胞(P0.05)。(2)細胞免疫熒光結果表明,相比于長白豬骨骼肌衛(wèi)星細胞,藍塘豬骨骼肌衛(wèi)星細胞的粘著斑表達更豐富,而F-肌動蛋白的表達量更低。(3)藍塘豬骨骼肌衛(wèi)星細胞在遷移24 h的p-FAK(Tyr397)和p-paxillin(Tyr118)蛋白表達顯著高于長白豬骨骼肌衛(wèi)星細胞(P0.05);藍塘豬骨骼肌衛(wèi)星細胞在粘附2 h的p-FAK(Tyr397),p-paxillin(Tyr118)和p-Akt(Ser473)蛋白表達顯著高于長白豬骨骼肌衛(wèi)星細胞(P0.05),粘附基因ITGB3存在差異的趨勢(P=0.053)。(4)以10μmol/L PF573228濃度處理藍塘豬骨骼肌衛(wèi)星細胞24 h,能顯著抑制p-FAK(Tyr397)的蛋白表達;且5和10μmol/L PF-573228處理能顯著抑制骨骼肌衛(wèi)星細胞的遷移能力(P0.05),骨骼肌衛(wèi)星細胞在10μmol/L PF-573228處理濃度下,細胞粘附能力受到抑制(P0.05)。(5)與對照組相比,PF-573228以5和10μmol/L濃度處理衛(wèi)星細胞能降低粘著斑的數量,抑制p-paxillin(Tyr118)和p-Akt(Ser473)的蛋白表達(P0.05),不影響F-肌動蛋白的變化。以上結果說明:藍塘豬和長白豬骨骼肌衛(wèi)星細胞遷移和粘附的差異與粘著斑和F-肌動蛋白的形成密切相關,FAK/paxillin信號通路可能參與兩品種骨骼肌衛(wèi)星細胞遷移和粘附差異的調控。
【關鍵詞】：FAK 豬骨骼肌衛(wèi)星細胞 細胞遷移 粘著斑 F-肌動蛋白
【學位授予單位】：華南農業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S828
【目錄】：

• 摘要3-5
• Abstract5-7
• 縮寫詞表7-10
• 1 前言10-13
• 2 材料與方法13-27
• 2.1 主要設備13
• 2.2 試劑與用品13-16
• 2.2.1 試劑13-14
• 2.2.2 主要試驗用品耗材14
• 2.2.3 試驗用品的清洗與消毒14
• 2.2.4 主要試劑的配制14-16
• 2.3 細胞模型16
• 2.4 試驗方法16-26
• 2.4.1 藍塘豬和長白豬骨骼肌衛(wèi)星細胞分離和鑒定16-17
• 2.4.2 藍塘豬和長白豬骨骼肌衛(wèi)星細胞培養(yǎng)和傳代17
• 2.4.3 豬骨骼肌衛(wèi)星細胞遷移和粘附能力測定17-18
• 2.4.4 細胞免疫熒光18
• 2.4.5 F-肌動蛋白染色18-19
• 2.4.6 抑制劑添加試驗19
• 2.4.7 總RNA抽提、DNase I消化、CDNA反轉錄和基因芯片試驗19-23
• 2.4.8 Western blot檢測目的蛋白23-26
• 2.5 數據處理26-27
• 3 結果與分析27-34
• 3.1 藍塘豬和長白豬骨骼肌衛(wèi)星細胞的鑒定27
• 3.2 總RNA樣品的質量檢測27-28
• 3.3 藍塘豬和長白豬骨骼肌衛(wèi)星細胞遷移能力比較28-29
• 3.4 藍塘豬和長白豬骨骼肌衛(wèi)星細胞粘附能力比較29
• 3.5 細胞免疫熒光檢測衛(wèi)星細胞F-肌動蛋白和粘著斑29-30
• 3.6 衛(wèi)星細胞遷移 24 h時FAK信號通路關鍵蛋白表達30
• 3.7 衛(wèi)星細胞粘附 2 h時FAK信號通路關鍵基因表達30-31
• 3.8 p-FAK抑制劑PF-573228處理對衛(wèi)星細胞遷移和粘附的影響31-33
• 3.9 p-FAK抑制劑PF-573228處理對FAK下游信號的影響33-34
• 4 討論34-38
• 4.1 豬骨骼肌衛(wèi)星細胞遷移和粘附34
• 4.2 FAK/paxillin信號通路調控豬骨骼肌衛(wèi)星細胞遷移34-35
• 4.3 Integrin/ FAK/paxillin信號通路調控豬骨骼肌衛(wèi)星細胞的粘附35-36
• 4.4 豬骨骼肌衛(wèi)星細胞骨架與粘著斑36
• 4.5 FAK信號通路參與骨骼肌發(fā)育36-37
• 4.6 PF-573228抑制劑對豬骨骼肌衛(wèi)星細胞遷移和粘附的影響37-38
• 5 結論38-39
• 致謝39-40
• 參考文獻40-44
• 附錄44

【參考文獻】

中國博士學位論文全文數據庫 前1條

1 馬喜山;豬骨骼肌發(fā)育相關基因的差異表達和多態(tài)性研究[D];中國農業(yè)科學院;2011年

，

本文編號：1060620