本文關(guān)鍵詞：硒對綿羊睪丸間質(zhì)細胞體外增殖及睪酮分泌的影響

  更多相關(guān)文章： 硒 增殖 凋亡 睪酮 ERK通路 睪丸間質(zhì)細胞

【摘要】：[目的]硒是動物生命活動過程中所必需的微量元素,對維持正常的細胞功能和生理過程具有重要的作用。近年來,大量研究表明硒對雄性動物的繁殖性能有重要影響,且參與調(diào)節(jié)精子發(fā)生過程中生精細胞的增殖和凋亡。目前關(guān)于硒對綿羊睪丸間質(zhì)細胞的作用鮮有報道。本試驗在綿羊睪丸間質(zhì)細胞培養(yǎng)液中添加不同濃度的硒,研究硒對綿羊睪丸間質(zhì)細胞體外增殖和睪酮分泌的影響,并進一步探究硒調(diào)節(jié)間質(zhì)細胞睪酮合成的分子機制,以期為闡明硒對雄性動物精子發(fā)生的調(diào)控作用提供一定的實驗依據(jù)。[方法]將綿羊睪丸間質(zhì)細胞在不同硒濃度的培養(yǎng)液中培養(yǎng)48 h后,使用MTT鑒定睪丸間質(zhì)細胞的增殖情況；使用流式細胞儀檢測凋亡細胞數(shù)目；采用比色法測定睪丸間質(zhì)細胞總SOD和GSH-Px活力及ROS含量；采用ELISA方法檢測睪丸間質(zhì)細胞睪酮分泌情況；采用熒光定量方法檢測細胞周期與凋亡及睪酮合成相關(guān)基因的表達情況；采用western blot方法檢測細胞周期及睪酮合成相關(guān)蛋白和ERK1/2蛋白的表達情況。[結(jié)果]隨著培養(yǎng)液中硒含量的增加,睪丸間質(zhì)細胞的增殖率逐漸降低,但2μmol/L組與4μmol/L組差異不顯著(P＜0.05)。各處理組中凋亡細胞數(shù)差異顯著(P0.05),且隨著硒濃度的升高而增加。隨著硒含量的增加,CASPASE 3. CASPASE 8.P21、P53的mRNA表達量逐漸升高；P21和P53的蛋白表達量逐漸升高；CDKl的mRNA和蛋白表達量逐漸降低；但是P27的mRNA和蛋白表達水平在各處理組中均差異不顯著。對照組的增殖率顯著低于2 μmol/L組(Pl0.05),但對照組與2 μmol/L組的凋亡數(shù)差異不顯著。GSH-Px在2 μmol/L組的活性顯著高于對照組(P＜0.05)。ROS在8 μmol/L組的含量顯著高于其它組(P＜0.05)。睪酮合成量呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢,且2μmol/L處理組合成量顯著高于對照組和8 μmol/L處理組(P0.05),睪酮合成相關(guān)基因StAR和3β-HSD在2 μmol/L組的mRNA及蛋白表達量顯著高于其它組(P0.05)。在對照組和2μmol/L組中,綿羊睪丸間質(zhì)細胞內(nèi)ERKl/2蛋白表達水平差異不顯著,但2μmol/L處理可顯著提高P-ERK1/2蛋白表達水平(P0.05)。添加抑制劑PD0325901處理組中睪酮合成量顯著低于未添加組(P0.05)。同時添加抑制劑后,2 μmol/L組間質(zhì)細胞睪酮合成量和3β-HSD、StAR表達量與對照組差異不顯著。[結(jié)論]硒能調(diào)控抗氧化酶活性和細胞周期及凋亡相關(guān)基因的表達,參與調(diào)節(jié)睪丸間質(zhì)細胞的增殖與凋亡。硒可通過ERK信號通路調(diào)節(jié)睪酮合成相關(guān)基因(StAR、3β-HSD)的表達,從而影響綿羊睪丸間質(zhì)細胞中睪酮的合成。
【關(guān)鍵詞】：硒 增殖 凋亡 睪酮 ERK通路 睪丸間質(zhì)細胞
【學(xué)位授予單位】：山西農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S826
【目錄】：

• 摘要8-9
• 前言9-10
• 第一章 文獻綜述10-18
• 1 硒與雄性動物生殖10-12
• 1.1 硒與精子發(fā)生10-12
• 1.2 硒與間質(zhì)細胞12
• 2 睪丸間質(zhì)細胞與精子發(fā)生12-14
• 2.1 睪酮與精子發(fā)生12-13
• 2.2 睪酮的生物合成13-14
• 3 睪酮分泌的調(diào)控14-17
• 3.1 下丘腦、垂體分泌激素對睪丸間質(zhì)細胞的調(diào)節(jié)作用14-15
• 3.2 微量元素對睪丸間質(zhì)細胞的影響15
• 3.3 MAPK-ERK信號通路15-17
• 4 小結(jié)17-18
• 第二章 硒對綿羊睪丸間質(zhì)細胞體外增殖及凋亡的影響18-39
• 1 材料與方法18-27
• 1.1 試驗材料18-20
• 1.1.1 試驗動物與樣品采集18
• 1.1.2 主要儀器設(shè)備18-19
• 1.1.3 主要試劑19
• 1.1.4 試劑的配制19-20
• 1.2 試驗方法20-27
• 1.2.1 綿羊睪丸間質(zhì)細胞的收集20
• 1.2.2 活細胞計數(shù)20-21
• 1.2.3 差異貼壁法純化21
• 1.2.4 睪丸間質(zhì)細胞接種21
• 1.2.5 綿羊睪丸間質(zhì)細胞的鑒定21
• 1.2.6 細胞培養(yǎng)21
• 1.2.7 綿羊睪丸間質(zhì)細胞增殖測定21-22
• 1.2.8 綿羊睪丸間質(zhì)細胞凋亡檢測22
• 1.2.9 超氧化物歧化酶(SOD)測定22
• 1.2.10 谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)測定22-23
• 1.2.11 活性氧(ROS)測定23-24
• 1.2.12 Real-time PCR24-26
• 1.2.13 Western blot26-27
• 1.2.14 數(shù)據(jù)分析27
• 2 結(jié)果與分析27-36
• 2.1 睪丸間質(zhì)細胞形態(tài)觀察27-28
• 2.2 綿羊睪丸間質(zhì)細胞3β-HSD染色鑒定28-29
• 2.3 硒對綿羊睪丸間質(zhì)細胞增殖的影響29
• 2.4 硒對綿羊睪丸間質(zhì)細胞凋亡的影響29-30
• 2.5 硒對綿羊睪丸間質(zhì)細胞總SOD活性的影響30-31
• 2.6 硒對綿羊睪丸間質(zhì)細胞GSH-Px活性的影響31-32
• 2.7 硒對綿羊睪丸間質(zhì)細胞ROS含量的影響32
• 2.8 硒對細胞周期和凋亡相關(guān)基因表達的影響32-35
• 2.9 硒對P21、P27、P53和CDK1蛋白表達的影響35-36
• 3 討論36-38
• 4 結(jié)論38-39
• 第三章 硒對綿羊睪丸間質(zhì)細胞睪酮合成及相關(guān)信號通路的影響39-50
• 1 材料與方法39-42
• 1.1 試驗材料39-40
• 1.1.1 試驗動物39
• 1.1.2 主要試劑39-40
• 1.1.3 主要儀器設(shè)備40
• 1.2 試驗方法40-42
• 1.2.1 樣品采集40
• 1.2.2 睪丸間質(zhì)細胞分離與純化40
• 1.2.3 細胞培養(yǎng)40-41
• 1.2.4 睪酮測定41
• 1.2.5 Real-time PCR41-42
• 1.2.6 Western blot42
• 1.2.7 數(shù)據(jù)分析42
• 2 結(jié)果與分析42-48
• 2.1 硒對綿羊睪丸間質(zhì)細胞睪酮合成的影響42-43
• 2.2 硒對3β-HSD和StAR表達的影響43-44
• 2.3 硒對3β-HSD和StAR蛋白表達的影響44-45
• 2.4 硒對綿羊睪丸間質(zhì)細胞ERK1/2和p-ERK1/2蛋白表達的影響45
• 2.5 ERK通路對綿羊睪丸間質(zhì)細胞睪酮合成及相關(guān)蛋白表達的影響45-47
• 2.6 ERK通路在硒調(diào)控睪酮合成及相關(guān)蛋白表達中的作用47-48
• 3 討論48-49
• 4 結(jié)論49-50
• 全文結(jié)論50-51
• 參考文獻51-58
• 附錄：碩士期間發(fā)表論文及獲獎情況58-60
• Abstract60-62
• 致謝62

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 劉建忠;睪丸間質(zhì)細胞調(diào)控的研究現(xiàn)狀[J];草食家畜;1994年03期

2 孫新明;李躍民;呂忠顯;彭良祖;王云;張家驊;;仔豬睪丸間質(zhì)細胞增殖和發(fā)育的組織學(xué)觀察[J];動物醫(yī)學(xué)進展;1997年01期

3 卿利娟;魏泓;李婧;肖榕;吳群;葛亮;商海濤;鄭小波;劉宇;;仔豬睪丸間質(zhì)細胞培養(yǎng)方法的比較[J];中國獸醫(yī)雜志;2013年11期

4 成鋼;;哺乳動物睪丸間質(zhì)細胞的分離及體外培養(yǎng)[J];中國畜牧獸醫(yī);2006年09期

5 張柳平;邵根寶;潘耀謙;;成年小鼠睪丸間質(zhì)細胞的分離、鑒定及功能檢測[J];動物醫(yī)學(xué)進展;2013年09期

6 張家驊,呂忠顯,李躍民,聶秀蘭,王鮮忠,胡益民,趙俊華;白細胞介素-1α調(diào)節(jié)仔豬睪丸間質(zhì)細胞睪酮分泌的機制[J];畜牧獸醫(yī)學(xué)報;1999年04期

7 王鮮忠,吳建云,孫燕,潘紅梅,張家驊;培養(yǎng)的睪丸間質(zhì)細胞對hCG刺激的反應(yīng)性[J];核農(nóng)學(xué)報;2005年04期

8 呂忠顯,張家驊,孫新明,李躍民;白細胞介素-1α對仔豬睪丸間質(zhì)細胞睪酮分泌的影響[J];中國獸醫(yī)學(xué)報;1999年03期

9 呂忠顯,張家驊,李躍民,孫新民;白細胞介素-1α對睪酮合成酶P_(450)17α活性的抑制[J];中國農(nóng)業(yè)科學(xué);2000年04期

10 楊建成;馮穎;吳高峰;孫長勉;胡建民;;�；撬釋w外培養(yǎng)大鼠睪丸間質(zhì)細胞睪酮分泌的影響[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2007年15期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 張柳平;崔勝;;大豆黃酮在成年雄性小鼠睪丸間質(zhì)細胞中的作用和相關(guān)機理研究[A];全國動物生理生化第十次學(xué)術(shù)交流會論文摘要匯編[C];2008年

2 湯雪明;張惠心;易靜;張嵐;;睪丸間質(zhì)細胞的吸附內(nèi)吞過程[A];中國細胞生物學(xué)學(xué)會第五次會議論文摘要匯編[C];1992年

3 馬海田;韓正康;王國杰;鄒思湘;;大豆異黃酮植物雌激素對大鼠睪丸間質(zhì)細胞分泌睪酮機理的研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會2004學(xué)術(shù)年會暨第五屆全國畜牧獸醫(yī)青年科技工作者學(xué)術(shù)研討會論文集（下冊）[C];2004年

4 劉建中;郭海彬;李曉原;鄧春華;孫祥宙;段艷芳;李燕;;激光照射大鼠睪丸間質(zhì)細胞的初步研究[A];中國光學(xué)學(xué)會2006年學(xué)術(shù)大會論文摘要集[C];2006年

5 李發(fā)弟;馬友記;趙有璋;夏東;趙茹茜;陳杰;;重組生長激素對豬睪丸間質(zhì)細胞睪酮分泌的影響[A];動物生理生化學(xué)分會第八次學(xué)術(shù)會議暨全國反芻動物營養(yǎng)生理生化第三次學(xué)術(shù)研討會論文摘要匯編[C];2004年

6 卞建春;郭恒杰;王捍東;劉學(xué)忠;袁燕;左雯璋;任建新;劉宗平;王宗元;康世良;;鎘對離體大鼠睪丸間質(zhì)細胞的損傷作用[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜內(nèi)科學(xué)分會2009年學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2009年

7 劉運強;陶大昌;楊元;馬用信;張思仲;;人睪丸間質(zhì)細胞特異表達基因RNF148的鑒定及其表達的表觀調(diào)控[A];第十二次全國醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2014年

8 鐘曼麗;王占友;;鋅轉(zhuǎn)運體ZnT8參與睪丸間質(zhì)細胞睪酮合成的分子機制研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第十二次全國內(nèi)分泌學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2013年

9 孫杰;施誠仁;張忠德;;異體睪丸間質(zhì)細胞移植治療原發(fā)性性腺功能低下癥[A];中華醫(yī)學(xué)會第八次全國男科學(xué)學(xué)術(shù)會議論文集[C];2007年

10 李靜;夏羽;袁蘇雅;李笑;段小亞;魏盟;卿素珠;;小鼠生后不同發(fā)育階段睪丸組織Crb3的表達[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會動物解剖學(xué)及組織胚胎學(xué)分會第十七次學(xué)術(shù)研討會論文集（下）[C];2012年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 李明;內(nèi)皮素-1對大鼠睪丸間質(zhì)細胞的作用[D];軍醫(yī)進修學(xué)院;2001年

2 鄭小波;c-jun對仔豬睪丸間質(zhì)細胞睪酮分泌影響的機理研究[D];西南大學(xué);2010年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 周錦華;永生化山羊睪丸間質(zhì)細胞系的建立[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2015年

2 閆秀文;bFGF對大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞向睪丸間質(zhì)細胞分化的作用研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2015年

3 黃小惠;體外誘導(dǎo)的睪丸間質(zhì)細胞對遲發(fā)性性腺功能減退大鼠的作用研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2016年

4 楊海婷;β_2腎上腺素受體激動劑克倫特羅對睪丸間質(zhì)細胞與脂肪細胞共培養(yǎng)體系中睪丸間質(zhì)細胞INSL3及3β-HSD的表達效應(yīng)[D];暨南大學(xué);2016年

5 徐文丹;Calretinin調(diào)節(jié)睪丸間質(zhì)細胞雄激素生成及其機制的研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2016年

6 劉昊;貴州某食用白酒對大鼠睪丸間質(zhì)細胞內(nèi)StAR、EGF、CgA的表達及血清睪酮水平的影響[D];貴州醫(yī)科大學(xué);2016年

7 文羅娜;矢車菊素-3-O-葡萄糖苷對鉛引起的睪丸間質(zhì)細胞R2C孕酮合成降低的干預(yù)作用[D];暨南大學(xué);2016年

8 宋瑞高;硒對綿羊睪丸間質(zhì)細胞體外增殖及睪酮分泌的影響[D];山西農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

9 王曉云;大鼠睪丸間質(zhì)細胞形態(tài)結(jié)構(gòu)、睪酮分泌及LH、AR、ER表達的增齡變化研究[D];河北師范大學(xué);2004年

10 吳國華;成年小鼠睪丸間質(zhì)細胞功能異質(zhì)性研究[D];首都師范大學(xué);2003年

，

本文編號：1023550