本文關鍵詞：利用單個細胞RT-PCR法克隆全人源性HBV單克隆抗體的探討

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【摘要】：目的建立外周血單個抗體分泌細胞分離和單個細胞RT-PCR系統(tǒng),高效快速克隆高度特異性、全人源性的HBV單克隆抗體。方法選擇3例HBV感染恢復期患者,從外周血中富集B淋巴細胞,加入HBcAg Peptide pool活化B淋巴細胞,流式分選出記憶性抗體分泌細胞(CD19~+CD10~-IgG~+CD27~+),通過有限稀釋法獲得單個細胞,單細胞RT-PCR反轉出cDNA,巢式PCR擴增抗體重鏈恒定區(qū)序列片段,將PCR產物純化并克隆至pEASY~汶-T1 simple克隆載體,進行測序鑒定。結果 ELISA結果顯示,3例HBV感染恢復期患者血漿中均檢測到較高水平IgG,與健康志愿者相比,差異均有統(tǒng)計學意義(P值均0.05)。流式結果顯示,B淋巴細胞比例均高于94%,且均可分離出記憶性抗體分泌細胞。從分離的抗體分泌細胞中挑選出24個含有1個形態(tài)完好的細胞,經鑒定,其中有14個擴增成功,且條帶在200 bp左右,與預期片段大小相符。對抗體重鏈序列分析顯示成功擴增出抗體恒定區(qū)片段。結論成功構建了單個抗體分泌細胞分離和單個細胞RT-PCR系統(tǒng),獲得了抗體重鏈序列,為后期全人源性乙型肝炎單克隆抗體的高通量生產打下了堅實的基礎。
【作者單位】： 吉林大學白求恩第一醫(yī)院轉化醫(yī)學研究院;吉林大學白求恩第一醫(yī)院肝膽胰內科;
【關鍵詞】： 肝炎病毒 乙型 抗體生成細胞 抗體 單克隆 逆轉錄聚合酶鏈反應
【基金】：科技部“十二五”艾滋病和病毒性肝炎等重大傳染病防治項目子課題(2013ZX10004609-004) 吉林省發(fā)展與改革委員會項目(2014N147)
【分類號】：R512.62
【正文快照】： 據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計,全球約有20億人感染HBV,其中超過3.6億發(fā)展成慢性HBV感染,每年超過100萬人死于HBV感染導致的肝癌或終末期肝病。我國HBV攜帶者高達9300萬人,其中3000萬人為慢性HBV感染,其結果為肝硬化、肝衰竭和肝癌[1-2]。目前,接種乙型肝炎疫苗是預防HBV感染最有效的措

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本文編號：981210