本文關鍵詞：阿薩希毛孢子菌抗氧化酶活性研究

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【摘要】：研究背景細胞在進行有氧呼吸代謝和能量生成的同時,也伴隨著細胞內活性氧介質(reactive oxygen species,ROS)的生成[1]。ROS主要包括超氧陰離子(O2·ˉ),過氧化氫(H2O2),羥基自由基(·OH)等,ROS的殺傷力非常強,不僅可以通過破壞核酸、氧化蛋白質、引起脂質過氧化影響多種細胞功能,而且ROS導致的氧化損傷正逐漸成為突變形成、細胞退化、老齡化和凋亡的重要因素[1]。大量病原微生物(如細菌、真菌)的研究表明:在感染宿主過程中,ROS主要來源于微粒體新陳代謝和由吞噬細胞產(chǎn)生的作為殺滅病原體過程的呼吸爆發(fā)[1]。此外,多項抗菌藥物,尤其是抗真菌藥物的研究也證實:唑類、多烯類、棘白霉素類藥物也可誘導細胞內ROS的生成[2]。為了生存,病原體進化了很多方式以清除或者修復氧化應激所帶來的有害損傷,同時也為其侵襲性感染與致病創(chuàng)造條件。研究表明:超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和過氧化氫酶(catalase,CAT)是保護真菌免受ROS氧化殺傷的兩種最主要的抗氧化酶,SOD主要催化O2·ˉ生成H2O2和O2;而CAT可催化H2O2生成H2O2和O2,同時減少·OH的產(chǎn)生,從而降低ROS的氧化損傷[3]。這在白念珠菌(Candida albicans,C.albicans)、煙曲霉(Aspergillus fumigatus,A.fumigatus)、新型隱球菌(Cryptococcus neoformans,C.neoformans)等常見致病真菌的研究中均已得到證實[4-9]。此外,還有學者發(fā)現(xiàn):CAT和SOD是構成C.albicans毒力的必要因素[4,5]。近年來,由于T.asahii引起的播散性毛孢子菌病的發(fā)病率呈明顯上升趨勢,占深部真菌感染患者的5%~10%[10],并且T.asahii對絕大多數(shù)抗真菌藥均耐藥,一旦該菌在機體造成播散性、系統(tǒng)性感染,死亡率可高達80%以上[11],這使得對T.asahii臨床感染的管理與防治變得更加棘手,因此,從抗氧化防御角度探索其感染與致病機制,對T.asahii感染的防治具有重要意義。在前期的研究中,本課題組宗麗娜等人[12]發(fā)現(xiàn):三種不同的氧化劑(甲萘醌、H2O2、二酰胺)可對T.asahii產(chǎn)生不同程度的氧化殺傷作用。因次,我們推測:與其他真菌病原體一樣,T.asahii也應該具有相應的抗氧化防御系統(tǒng),使T.asahii能夠入侵宿主體內并造成嚴重感染而致病。為了驗證這一假設,本課題收集筆者所在實驗室現(xiàn)有的44株不同來源的T.asahii,測定其SOD和CAT酶活性并進行比較和分析,初步探索其抗氧化防御機制,為進一步研究該菌的感染與致病機制奠定基礎。研究目的1.觀察和比較T.asahii環(huán)境分離菌株和與臨床分離菌株抗氧化酶活性;2.觀察小鼠體內傳代對T.asahii菌株抗氧化酶活性的影響。3.觀察氟康唑耐藥誘導對T.asahii菌株抗氧化酶活性的影響。研究方法.1.收集44株不同來源T.asahii菌株,將其分為環(huán)境組、臨床組、體內傳代組和體外耐藥組四組;取上述菌株新鮮單菌落接種于PDA培養(yǎng)基上35℃生長48h;配置濃度為1.5×108cfu/ml的0.9%無菌生理鹽水和T.asahii的懸液;取1ml菌懸液添加到50ml SDB培養(yǎng)基中,震蕩培養(yǎng)48h(37℃,150r/min);離心機分離,取下層細胞沉淀用玻璃珠溶解法溶解;強振蕩后再次離心機分離,取上層清液用于酶活性的測定。2.用總超氧化物歧化酶測試盒和過氧化氫酶測定試劑盒分別測定過氧化氫酶和超氧化物歧化酶活性,具體操作方法按照說明書執(zhí)行。BCA法測定蛋白質濃度:用標準血清蛋白作對照。重復3遍。3.SPSS 13.0統(tǒng)計軟件分析數(shù)據(jù)。結果1.環(huán)境組:菌株CBS8904、CBS7137、CBS8520 SOD酶活性分別為3.828、3.46、4.75U/mgprot,均值為4.01±0.66U/mgprot,CAT酶活性分別為45.833、42.61、57.082U/mgprot,均值為48.51±7.60U/mgprot。2.臨床組:不同臨床分離來源菌株抗氧化酶活性不同,SOD酶活性變化范圍為6.221~16.826U/mgprot,均值為10.45±3.87U/mgprot,CAT酶活性變化范圍為61.956~164.552U/mgprot,均值為110.56±35.77U/mgprot。3.體內傳代組:小鼠體內傳代第1~5代后,菌株CBS2479、CBS8904、CBS7137和CBS8520的抗氧化酶活性均逐漸升高。臨床標準株CBS2479傳代前和傳5代后的SOD酶活性分別為:6.221 U/mgprot和14.610 U/mgprot(P0.05);其CAT酶的活性分別為61.956 U/mgprot和89.045 U/mgprot(P0.05)。環(huán)境株CBS8904傳代前和傳5代后的SOD酶活性分別為:3.828 U/mgprot和7.854U/mgprot(P0.05);其CAT酶的活性分別為45.833 U/mgprot和61.418U/mgprot(P0.05)。環(huán)境株CBS7137傳代前和傳5代后的SOD酶活性分別為:3.460U/mgprot和5.016 U/mgprot(P0.05);其CAT酶的活性分別為42.610U/mgprot和66.025 U/mgprot(P0.05)。環(huán)境株CBS8520傳代前和傳5代后的SOD酶活性分別為:4.750U/mgprot和7.115 U/mgprot(P0.05);其CAT酶的活性分別為57.082U/mgprot和68.964 U/mgprot(P0.05)。4.體外耐藥組:氟康唑耐藥誘導后,菌株CBS2479和CBS8904抗氧化酶活性隨誘導代數(shù)的遞增而逐漸升高。臨床標準株CBS2479誘導前和誘導10代后的SOD酶活性分別為:6.221 U/mgprot和9.126 U/mgprot(P0.05);其CAT酶的活性分別為61.956 U/mgprot和86.738 U/mgprot(P0.05)。環(huán)境株CBS8904誘導前和誘導10代后的SOD酶活性分別為:3.838 U/mgprot和6.921 U/mgprot(P0.05);其CAT酶的活性分別為45.833 U/mgprot和74.128 U/mgprot(P0.05)。而在回復末期,菌株CBS2479和CBS8904抗氧化酶SOD和CAT活性逐漸恢復至正常水平。結論1.T.asahii臨床組菌株SOD和CAT酶活性顯著高于環(huán)境組。體內傳代組菌株的抗氧化酶活性隨傳代次數(shù)的遞增而逐漸升高;至傳代末期第5代菌株SOD和CAT酶活性顯著高于傳代前;且其CAT酶活性也明顯高于環(huán)境組。耐藥組菌株抗氧化酶活性隨誘導代數(shù)的遞增而逐漸升高;至誘導末期第10代菌株SOD和CAT酶活性顯著高于誘導前;且其SOD和CAT酶活性均明顯高于環(huán)境組。2.不同來源T.asahii抗氧化能力不同,主要體現(xiàn)在抗氧化酶活性的不同,其中,臨床組菌株抗氧化能力最強;體內傳代組菌株和耐藥組菌株次之;環(huán)境組菌株最低。
【關鍵詞】：過氧化氫酶 超氧化物歧化酶 阿薩希毛孢子菌
【學位授予單位】：山西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R756
【目錄】：

• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-12
• 常用縮寫詞中英文對照表12-14
• 前言14-16
• 技術路線16-17
• 1 材料與方法17-24
• 1.1 材料17-22
• 1.2 方法22-23
• 1.3 統(tǒng)計學分析23-24
• 2 結果24-29
• 2.1 T.asahii環(huán)境組與臨床組抗氧化酶活性結果24-25
• 2.2 T.asahii體內傳代組抗氧化酶活性結果25-26
• 2.3 T.asahii耐藥組組抗氧化酶活性結果26-29
• 3 討論29-32
• 4 結論32-33
• 參考文獻33-36
• 綜述36-42
• 參考文獻39-42
• 在學期間發(fā)表的學術論文與研究成果42-44
• 致謝44-45
• 個人簡歷45

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中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 ;提高宿主}D~T黃嘌呤氧化酶活性對流行性乙型腦炎病毒感染性的影響[J];浙醫(yī)學報;1965年03期

2 趙習Y，

本文編號：778162