本文關鍵詞：順鉑誘導HBV再激活的分子機制研究

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【摘要】：據(jù)世界衛(wèi)生組織報道,全世界目前約有20億人曾感染過乙肝病毒,其中約有4億成為乙肝表面抗原陽性的慢性攜帶者,而其中的75%的慢性攜帶者是中國人;中國每年因乙肝病毒感染致死的近50萬人,居全球首位。在我國,乙型肝炎病毒感染是誘發(fā)慢性肝炎,肝硬化和肝癌的重要危險因子。據(jù)統(tǒng)計,HBV再激活現(xiàn)象在無癥狀攜帶者和慢性乙肝患者中極少發(fā)生,但如果接受免疫抑制劑或或化療藥物治療時,會有一定幾率活化處于靜息狀態(tài)或是低復制狀態(tài)的乙肝病毒.大量瞬時活化的乙肝病毒會誘發(fā)患者急性肝炎、急性肝衰竭甚至爆發(fā)性肝衰竭,使化療中斷,耽誤腫瘤患者的正常治療和預后,嚴重時可能危及患者生命。2011年,惡性腫瘤上升為人類死亡病因的第3位,其發(fā)病率和致死人數(shù)逐年上升。2011年,臨床統(tǒng)計HBV再激活的發(fā)病率為14%-66%,HBV再激活已經成為嚴重威脅中國人健康的重要公共衛(wèi)生問題。順鉑等化療藥物可以誘導HBV再激活的現(xiàn)象已被國內外多項臨床試驗證實,但是其誘導乙肝病毒復制再激活的分子機制至今尚不清楚。目前解釋該現(xiàn)象的機制有兩種:第一種,化療藥物如順鉑具有很強的免疫抑制能力,通過抑制機體的免疫系統(tǒng),使乙肝病毒免疫逃逸,乙肝病毒大量復制誘發(fā)HBV再激活。大多數(shù)學者認同這一機制。第二種,化療藥物順鉑可以直接促進乙肝病毒復制。目前國內外關于順鉑直接促進hbv再激活以及相關分子機制的研究報道還是空白,本課題設計就是針對這一空白,研究探討順鉑直接促進hbv復制的相關的分子通路。我們首先在體外成功構建了環(huán)化自連的hbvdna(circμlarizedhbvdna)并證實:無論在體內還是體外,環(huán)化的hbvdna的感染效率和復制水平均明顯優(yōu)于線性的hbvdna(p0.05)。使用環(huán)化的hbvdna構建的hbv水動力小鼠模型,并使用回交傳代法提高已有的c57hbv轉基因小鼠的遺傳穩(wěn)定性,為下一步的實驗研究提供hbv高效復制的動物模型。其次選用乙肝病毒穩(wěn)定表達的c57hbv轉基因小鼠模型和前期構建的hbv水動力小鼠模型,通過elisa、real-timepcr、western-blot、southern-blot、ihc和chip等實驗進行hbv再激活的體內驗證實驗,檢測順鉑是否可以在體內誘導hbv再激活。實驗研究順鉑誘導hbv再激活的分子機制:首先,篩選與hbv再激活相關的hbv啟動子和肝富集轉錄因子;其次,選取其中代表性的轉錄因子pgc-1α和hnf-4α進行體內外驗證;通過chip等實驗證明pgc-1α、hnf-4α在順鉑誘導hbv復制過程中發(fā)揮重要作用;進一步構建pgc-1α和hnf-4α的sirna,體內外反向驗證pgc-1α和hnf-4α是否為順鉑誘導hbv再激活的關鍵因子;同時通過elisa、real-timepcr、western-blot等實驗篩選內質網應激相關因子,探討內質網應激與hbv再激活的相關性及其關鍵因子。實驗證實順鉑一方面可以通過直接上調hbv復制相關轉錄因子pgc-1α和hnf-4α的表達,增強hbv核心啟動子活性,繼而在轉錄水平上調hbv的復制;另一方面可以引起內質網應激,UPR(未折疊蛋白反應)誘發(fā)PGC-1α表達上調,間接上調HBV復制。結論:化療藥物順鉑可以在體內外直接增強HBV復制與轉錄從而誘導HBV再激活。其分子通路可能有兩條:1.PGC-1α和HNF-4α通路,肝富集轉錄因子PGC-1α和HNF-4α作為共激活因子,可以共同結合于HBV DNA增強子Ⅰ和增強子Ⅱ上,順鉑可以直接上調肝富集轉錄因子PGC-1α和HNF-4α的表達,直接增強乙肝病毒的復制,引起HBV再激活;2.順鉑可以引起內質網應激(ERS),內質網應激可以誘導PGC-1α表達上調,間接上調HBV復制。通過對順鉑誘導HBV再激活分子機制的研究,我們可以找到阻斷該現(xiàn)象的藥物靶點,預防用藥降低臨床HBV再激活的發(fā)生率,改善腫瘤患者的預后和生存質量。
【關鍵詞】：順鉑 乙肝病毒 病毒復制 HBV再激活
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R512.62
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照4-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-13
• 前言13-16
• 第一部分 乙型肝炎病毒穩(wěn)定復制小鼠模型的構建，保種及檢測16-34
• 1 材料與方法16-25
• 2 結果25-30
• 3 討論30-34
• 第二部分HNF-4α、PGC-1α 在順鉑誘導HBV再激活機制中的重要作用34-52
• 1 材料與方法34-45
• 2 結果45-48
• 3 討論48-52
• 第三部分 沉默HNF-4α、PGC-1α 抑制順鉑誘導HBV再激活52-69
• 1 材料與方法52-60
• 2 結果60-67
• 3 討論67-69
• 第四部分 內質網應激（ERS）上調PGC-1α，間接輔助順鉑誘導HBV再激活69-79
• 1 材料與方法69-72
• 2 結果72-76
• 3 討論76-79
• 參考文獻79-83
• 全文總結83-85
• 文獻綜述85-94
• 參考文獻91-94
• 致謝94-95
• 攻讀學位期間發(fā)表的學術論文95-96
• 攻讀碩士期間參加的學術會議96

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 María Luisa Manzano-Alonso;Gregorio Castellano-Tortajada;;Reactivation of hepatitis B virus infection after cytotoxic chemotherapy or immunosuppressive therapy[J];World Journal of Gastroenterology;2011年12期

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本文編號：635401