干血斑和血清樣本用于檢測乙型肝炎病毒DNA及耐藥突變的比較
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【摘要】:目的驗證干血斑(DBS)樣本替代靜脈血血清樣本用于檢測乙型肝炎病毒(HBV)基因診斷的可行性。方法選擇慢性乙型肝炎患者100例,血清HBV的病毒載量1×102拷貝/m L,抽取靜脈血同時制備DBS樣本和血清樣本,進行HBV DNA定量檢測,比較DBS與血清樣本檢測結果的相關性。選取73例基因型主要為B、C型的患者,進行DBS和血清樣本基因型檢測的比較。同時隨機選取56例乙型肝炎患者的DBS和血清樣本,采用實驗室自建的套式聚合酶鏈反應(PCR)擴增HBV的逆轉錄酶(RT)區(qū)段,通過geno2pheno數(shù)據(jù)庫進行結果分析,比較二者耐藥性的檢測結果。結果 DBS樣本HBV DNA的檢測范圍為2~8 log10拷貝/m L,與血清樣本HBV DNA的檢測結果高度相關(r2=0.82,P0.05),DBS樣本HBV DNA定量值比血清樣本低1個數(shù)量級。2種樣本HBV耐藥性檢測結果的總符合率為95.83%;DBS和血清樣本耐藥狀態(tài)的檢出率分別為82.14%和85.71%(P0.05)。2種樣本HBV基因分型結果的符合率為100.00%。結論 DBS樣本可用于HBV DNA的定量及耐藥性的檢測。
【作者單位】: 上海市公共衛(wèi)生臨床中心醫(yī)學檢驗科;上海市公共衛(wèi)生臨床中心應急檢測和生物安全部;
【關鍵詞】: 干血斑 乙型肝炎病毒 DNA 耐藥性
【基金】:上海市科學技術委員會西醫(yī)引導類項目(124119a1200) 上海市衛(wèi)生和計劃生育委員會科研課題青年項目(20144Y0075)
【分類號】:R512.62;R440
【正文快照】: HBV DNA檢測。采用ABI 7500和Gene Amp PCRsystem 9700(美國Applied Biosystem公司)進行熒光定量聚合酶鏈反應(polymerase chainreaction,PCR)。三、方法1.DBS和血清樣本的HBV DNA檢測和相關性分析(1)DBS樣本的制備:50μL全血制作1個單位DBS樣本,室溫自然干燥,4℃保存,檢測時
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