我們前期研究中,從具有廣譜中和活性的HIV-1感染者(DRVI01)分離獲得了一株針對CD4結(jié)合位點的VRC01樣廣譜單克隆中和抗體DRVIA7(A7)。系統(tǒng)分析A7連續(xù)5年間的發(fā)展表明,抗體重鏈在兩年內(nèi)快速成熟,但抗體輕鏈發(fā)展受阻于gp120蛋白LoopD區(qū)及V5區(qū)的糖鏈,導(dǎo)致該譜系抗體有限的中和寬度。如果能找到與A7譜系早期抗體結(jié)合的膜蛋白(Env),或通過Env改造設(shè)計中和難度逐漸加大的免疫原,或許能誘導(dǎo)出A7樣抗體甚至幫助抗體越過糖分子障礙。本課題將在前期對A7抗體研究的基礎(chǔ)上,系統(tǒng)分析感染者五年間6個時間點的病毒膜蛋白及其中和表型特征。第一部分對DRVI01感染者的膜蛋白基因及其中和特征研究中,我們通過單拷貝基因組擴增(SGA)技術(shù)獲得156條全長膜蛋白基因,篩選鑒定出68個功能性膜蛋白并制備了假病毒。序列分析和假病毒中和實驗顯示,DRVI0]體內(nèi)膜蛋白序列多樣性的逐漸增加與A7譜系抗體的出現(xiàn)和成熟一致;廣譜高效中和活性及自體病毒逃避同期血漿中和的能力,與膜蛋白上抗體識別位點較多的氨基酸變異一致,提示病毒和抗體間連續(xù)的共進化現(xiàn)象。序列分析還發(fā)現(xiàn)了幾個可能有利于CD4bs抗體識...

【文章頁數(shù)】：145 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１．?ＤＲＶＩ０１的膜蛋白Ｎ－Ｊ進化樹圖，包括六個時間點的１５６條膜蛋白序列和ＨＸＢ２

２．１膜蛋白基因系統(tǒng)進化分析??將六個時間點獲得的膜蛋白基因序列和Ｂ亞型參考序列ＨＸＢ２通過ＭＥＧＡ５．０５構(gòu)建??Ｎｅｉｇｈｂｏｕｒ－Ｊｏｉｎｉｎｇ進化樹（圖１），相同時間點的序列標(biāo)記為同一種顏色。結(jié)果顯示不同??時間點的序列相互交叉分布，提示ＨＩＶ－１在機體免疫壓力下的連續(xù)進....

圖２．Ｇｐｌ６０氨基酸長度、糖基化數(shù)目及ＮＸＴ：ＮＸＳ比值的比較

２．３膜蛋白序列長度及糖基化位點分析??為了分析膜蛋白的變化特征，我們比較了六個不同時間點的膜蛋白序列氨基酸長度??及糖基化數(shù)目，以及ＮＸＳ與ＮＸＴ的比值。如圖２所示，六個時間點的膜蛋白氨基酸長??度比較恒定，相互間無顯著差異。但六個時間點的糖基化數(shù)目變異較大，最后一個時間??點....

圖３．ＤＲＶＩ０１膜蛋白ＶＲＣ０１抗體主要表位在六個時間點進化模式分析??３假病毒中和敏感性分析??

圖３．ＤＲＶＩ０１膜蛋白ＶＲＣ０１抗體主要表位在六個時間點進化模式分析??３假病毒中和敏感性分析??使用五個時間點的功能性克隆構(gòu)建的假病毒，分別和各時間點的自體血漿、六種代??表性單克隆ｂＮＡｂｓ及重構(gòu)的Ａ７譜系抗體進行中和試驗，以分析該病人膜蛋白的中和特??征。??３．１假病毒....

圖１．?ｇｐｌ２０與ＶＲＣＯ丨復(fù)合物表面結(jié)構(gòu)圖，綠色部分為ｇｐｌ２０部分，棕色部分為ＶＲＣ０１輕鏈，??紫色為ＶＲＣ０１重鏈，方框部分為ｇｐｌ２０的ＬｏｏｐＤ區(qū)

?第：：部分實驗結(jié)果??變引起的結(jié)構(gòu)變化（圖１、圖２）。??１．５．１?ＬｏｏｐＤ區(qū)Ｄ２７９Ｅ、Ｋ２８１Ｒ突變株結(jié)構(gòu)模擬分析??根據(jù)上述點突變和區(qū)域置換的結(jié)果，ＬｏｏｐＤ區(qū)的Ｄ２７９Ｅ、Ｋ２８１Ｒ突變以及Ｖ５區(qū)的??Ｅ４６４Ｔ突變是造成ＤＲＶＩ０１患者ＨＩＶ－１毒株對ＶＲＣ０１抵....

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