發(fā)布時間：2023-05-31 21:54

　　目的:NK細胞是固有免疫系統(tǒng)中一類大顆粒淋巴細胞,其主要表達CD56分子和/或CD16分子,不表達CD3分子,在抗腫瘤及抗病毒反應中均起到了重要的作用,是免疫系統(tǒng)的第一道防線。根據(jù)其表面的不同標志物可將NK細胞劃分為不同的亞群,不同的亞群發(fā)揮著不同的功能,包括細胞因子分泌、殺傷靶細胞以及免疫調節(jié)作用。單細胞測序作為一項新興的技術,主要被應用于細胞類型鑒定、細胞異質性、信號通路差異響應及分子調控網(wǎng)絡等方面的研究。HIV的感染會導致NK細胞亞群分布及功能的改變,但利用單細胞測序技術研究健康對照及HIV感染者總NK細胞亞群變化還尚未見報道;針對人類CD56⁺NK細胞,出現(xiàn)了以CD11b、CD27分子劃分的新的分群方式,而在對HIV感染的研究中,有關新的分群方式來定義CD56⁺NK細胞亞群及功能的研究仍未見報道;HIV感染導致NK細胞中CD56^-CD16⁺亞群數(shù)量的增加,該亞群的殺傷功能及細胞因子分泌功能減弱,但CD56^-CD16⁺亞群是否發(fā)揮著免疫調節(jié)功能未知。...

【文章頁數(shù)】：121 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
英文縮略語
第一部分 :單細胞測序揭示HIV感染者總NK細胞亞群特征
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 實驗對象
        2.2 實驗材料
            2.2.1 實驗試劑與耗材
            2.2.2 實驗儀器
        2.3 實驗方法
            2.3.1 外周血中分選NK細胞
            2.3.2 單細胞樣本的制備及檢測
            2.3.3 單細胞測序結果的分析
            2.3.4 GO及KEGG分析
    3 結果
        3.1 樣本的質量控制
        3.2 健康人NK細胞基因水平的亞群分布特征
        3.3 健康人及HIV感染者NK細胞相關性分析
        3.4 HIV感染導致NK細胞功能改變
    4 討論
    5 結論
第二部分 :HIV感染者CD56+NK細胞應用CD11b CD27定義的各個亞群功能及其調節(jié)作用的研究
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 實驗對象
        2.2 實驗材料
            2.2.1 實驗試劑
            2.2.2 實驗儀器
        2.3 實驗方法
            2.3.1 NK細胞CD11b CD27亞群分群情況的檢測
            2.3.2 NK細胞CD11b CD27亞群表面受體表達情況檢測
            2.3.3 NK細胞CD11b CD27亞群分泌IFN-γ、CD107 脫顆粒的檢測
            2.3.4 NK細胞CD11b CD27亞群殺傷功能的檢測
            2.3.5 NK細胞CD11b CD27亞群分泌IL-10、TGF-β的檢測
            2.3.6 NK細胞CD11b CD27亞群Granzyme B及 Perforin存儲情況的檢測
            2.3.7 NK細胞CD11b CD27亞群抑制CD4+T 細胞增殖的檢測
            2.3.8 統(tǒng)計學分析
    3 實驗結果
        3.1 HIV感染者CD11b⁺CD27-亞群百分比降低,CD11b^-CD27^-亞群百分比顯著升高
        3.2 HIV感染者CD11b CD27定義的NK亞群活化性受體增高,但CD11b^-CD27^-NK亞群低表達活化性受體
        3.3 CD11b^-CD27^-NK亞群呈現(xiàn)幼稚的表型特征
            3.3.1 CD11b^-CD27^-NK亞群低表達成熟marker——CD11c
            3.3.2 CD11b^-CD27^-NK亞群低表達衰老marker——CD
            3.3.3 CD11b^-CD27^-NK亞群幼稚marker——CCR7表達高于CD11b⁺CD27^-NK亞群
        3.4 CD11b CD27定義的NK細胞亞群checkpoint點的表達水平在HIV感染者中顯著升高
        3.5 CD11b^-CD27-NK亞群細胞代謝特征
            3.5.1 CD11b^-CD27^-NK亞群葡萄糖轉運體表達較低
            3.5.2 CD11b^-CD27^-NK亞群脂質受體高于CD11b⁺CD27^-NK亞群
            3.5.3 CD11b^-CD27^-NK亞群氨基酸受體高于CD11b⁺CD27^-NK亞群
        3.6 CD11b^-CD27^-NK亞群分泌IFN-γ及CD107a的脫顆粒功能不良
        3.7 CD11b^-CD27^-NK亞群顆粒霉及穿孔素儲存能力良好,釋放能力受損
        3.8 CD11b^-CD27^-NK亞群分泌負向調節(jié)因子
        3.9 CD11b^-CD27^-NK亞群能夠抑制CD4⁺T 細胞增殖
    4 討論
    5 結論
第三部分 :HIV感染者CD56^-NK細胞的變化及調節(jié)作用的研究
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 研究對象
        2.2 實驗材料
            2.2.1 實驗試劑
            2.2.2 實驗儀器
        2.3 實驗方法
            2.3.1 NK細胞亞群及分泌IL-10及TGF-β檢測
            2.3.2 NK細胞、T細胞分選及IFN-γ的檢測
            2.3.3 NK細胞表面PD-L1表達情況的檢測
            2.3.4 CD8⁺T細胞表面PD-1表達情況的檢測
            2.3.5 NK細胞IL-10及TGF-β封閉實驗
            2.3.6 NK細胞PD-L1封閉實驗
            2.3.7 統(tǒng)計學分析
    3 實驗結果
        3.1 HIV感染者CD56^-CD16⁺NK細胞百分比顯著增高
        3.2 HIV感染者CD56^-CD16⁺NK細胞分泌高水平IL-10及TGF-β
        3.3 HIV感染者CD56^-CD16⁺NK亞群抑制CD8⁺T細胞功能
        3.4 阻斷CD56^-CD16⁺NK細胞分泌的IL-10及TGF-β可部分恢復CD8⁺T 細胞功能
        3.5 CD56^-CD16⁺NK細胞通過直接接觸抑制CD8⁺T細胞功能
        3.6 HIV感染未治療患者CD56^-CD16⁺NK細胞Tigit未升高
        3.7 HIV感染者CD8⁺T 細胞高表達PD-1,CD56^-CD16⁺NK細胞高表達其配體PD-L1
        3.8 封閉CD56^-CD16⁺NK細胞高表達的PD-L1 可部分恢復CD8⁺T 細胞分泌IFN-γ功能
    4 討論
    5 結論
本研究創(chuàng)新性的自我評價
參考文獻
綜述
    參考文獻
攻讀學位期間取得的研究成果
致謝
個人簡歷



本文編號：3826070