目的建立改良單疊氮丙啶(propidium monoazide xx,PMAxx)-熒光定量PCR(qPCR)鑒定MTB活菌和熱滅活菌的方法,并探討PMAxx-qPCR進(jìn)行抗結(jié)核藥物體外活性檢測(cè)的價(jià)值。方法通過(guò)活菌和熱滅活菌優(yōu)化PMAxx針對(duì)MTB菌株H37Rv的預(yù)處理?xiàng)l件,包括曝光時(shí)間、暗孵育時(shí)間、PMAxx濃度,以及靶標(biāo)DNA片段長(zhǎng)度等。通過(guò)繪制量效曲線和建立循環(huán)閾值(Cq)與菌負(fù)荷的標(biāo)準(zhǔn)曲線,應(yīng)用PMAxx-qPCR法計(jì)算測(cè)定異煙肼(INH)、利福平(RFP)的體外抗菌活性,評(píng)價(jià)檢測(cè)敏感度,并分別與微孔板Alamar Blue(MABA)法和菌落形成單位(CFU)計(jì)數(shù)法進(jìn)行比較,菌落計(jì)數(shù)采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果當(dāng)細(xì)菌負(fù)荷設(shè)定為10⁷ CFU/ml時(shí),在PMAxx濃度為10μmol/L、暗孵育10 min后曝光15 min可有效鑒別活菌、死菌(△Cq_死-活=6.772±0.453),且使用>200 bp靶標(biāo)片段可更有效地反映活菌、死菌的差異。PMAxx-qPCR方法在藥物作用后3d...

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【文章目錄】：
資料和方法
    一、結(jié)核分枝桿菌標(biāo)準(zhǔn)株
    二、主要試劑和儀器
        1.試劑:
        2.儀器:
    三、實(shí)驗(yàn)方法
        (一)菌液制備
        (二)PMAxx處理?xiàng)l件優(yōu)化
        (三)PMAxx處理的相關(guān)影響因素
        (四)抗結(jié)核藥物活性檢測(cè)
    四、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
結(jié)果
討論



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