丙型肝炎病毒（Hepatitis C virus,HCV）是肝炎、肝硬化甚至肝癌等肝臟疾病的主要致病因素之一。HCV患者多、傳播廣、變異快等特點為其治療帶來了難度。目前HCV主要治療手段是通過直接抗病毒藥物DAA,而靶向HCV宿主因子是另一種抗HCV的策略,人類尚沒有研制出針對HCV的有效疫苗。HCV生命周期的主要步驟包括病毒進入宿主細胞,病毒基因組的脫殼,病毒蛋白的翻譯,病毒基因組的復制以及病毒微粒的組裝和釋放。其中病毒進入細胞的過程由多種共受體介導,如CLDN1、CD81、SR-BI及Occludin等。在本論文中,我們確定了 CLDN12和UGGT1可以作為宿主因子在HCV進入過程中發(fā)揮重要作用。實驗表明,敲降CLDN12可以抑制HCV進入細胞,而過表達CLDN12可以促進HCV進入細胞。因此我們猜測CLDN12是HCV的一個共受體。同時我們發(fā)現(xiàn),CLDN12同另一個HCV共受體CLDN1一樣,可以與共受體CD81結合,這從另一方面支持了我們的假設。此外,CLDN12與claudins家族蛋白CLDN1、CLDN6、CLDN9一樣,可以和COPⅡ運輸途徑中關鍵的貨物分選蛋白Sec... 

【文章頁數(shù)】：81 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
前言
    1 HCV簡介
        1.1 HCV及其發(fā)病率和治療現(xiàn)狀
        1.2 HCV的基因分型
        1.3 HCV病毒基因組
        1.4 HCV的生命周期
        1.5 HCV entry過程
    2 Claudins以及CLDN12
    3 SR-BI
    4 糖基化和N糖基化
    5 UGGTI
    6 研究內容概述
材料與方法
    1 實驗材料
        1.1 細胞
        1.2 質粒
        1.3 抗體
        1.4 細胞培養(yǎng)相關
        1.5 固體化學藥品
        1.6 液體試劑
        1.7 SiRNA序列
        1.8 Q-PCR引物
        1.9 試劑盒
        1.10 Buffer配方
        1.11 實驗儀器與耗材
    2 實驗方法
        2.1 細胞培養(yǎng)
        2.2 HCV病毒株Jcl和假病毒HCVpp的制備
        2.3 免疫印跡
        2.4 免疫共沉淀
        2.5 原核蛋白的表達與純化
        2.6 GST-pull down
        2.7 免疫熒光
        2.8 Q-PCR
        2.9 分子克隆及點突變
        2.10 敲降實驗
        2.11 蛋白質折疊測定
        2.12 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計
實驗結果
    第一部分
        1.1 CLDN12是HCV共受體
            1.1.1 CLDN 12促進HCV侵染宿主細胞
            1.1.2 CLDN12和CD81的相互作用
        1.2 CLDN12是COPⅡ貨物
            1.2.1 CLDN12 tail與Sec24C相互作用
            1.2.2 COPⅡ影響CLDN12定位
        1.3 宿主因子CLDN12的N-糖基化影響HCV
            1.3.1 CLDN12發(fā)生N-糖基化
            1.3.2 CLDN12的N-糖基化影響CLDN12細胞內分布
        第一部分 總結
    第二部分
        2.1 SR-BI與UGGT1和Calnexin的相互作用
            2.1.1 質譜鑒定分析SR-BI與UGGT1和Calnexin的相互作用
            2.1.2 Co-IP驗證SR-BI與UGGT1和Calnexin相互作用
            2.1.3 SR-BI在Huh7.5.1細胞中與UGGT1和Calnexin存在共定位
        2.2 SR-BI的N-糖基化
            2.2.1 SR-BI蛋白水平依賴于UGGT1和N-糖基化
            2.2.2 預測的九個位點均參與SR-BI的N-糖基化
        2.3 UGGT1升高SR-BI水平,促進HCV感染
        2.4 SR-BI促進UGGT1介導的蛋白質折疊
        第二部分 總結
討論
參考文獻
綜述
    參考文獻
縮略語
致謝
個人簡歷


【參考文獻】：
期刊論文
[1]丙型肝炎病毒非結構蛋白與宿主細胞蛋白相互作用的研究進展[J]. 張丹,馮國和.  世界華人消化雜志. 2011(02)
[2]四跨膜蛋白超家族與肝炎病毒的關系[J]. 張黎穎,成軍,紀冬,劉妍,黨曉燕,王春花,鄧紅,劉敏.  胃腸病學和肝病學雜志. 2004(01)

碩士論文
[1]基孔肯雅病毒nsP1蛋白棕櫚酰化的研究[D]. 張娜.北京協(xié)和醫(yī)學院 2018
[2]病毒蛋白NS3、K7及2C與宿主蛋白相互作用的研究[D]. 李葉.北京協(xié)和醫(yī)學院 2018
[3]不同基因型的丙肝病毒NS5A蛋白與PI4KB競爭結合ACBD3的研究[D]. 楊小潔.北京協(xié)和醫(yī)學院 2015



本文編號：3691496