乙型肝炎是一種嚴(yán)重的全球性疾病,易引發(fā)肝硬化和肝癌。目前國(guó)內(nèi)外尚無(wú)顯著有效的乙肝治療方法,主要采用預(yù)防為主、治療為輔的方針。自從1981年第一代乙肝疫苗問(wèn)世至今,乙型肝炎的蔓延得到有效地控制,全球肝癌的發(fā)生率下降了75%。目前全球廣泛使用的是利用基因工程技術(shù)在酵母和哺乳動(dòng)物細(xì)胞中表達(dá)的乙肝病毒表面抗原S蛋白（HBsAg）疫苗,接種疫苗后約有10-15%的人群無(wú)應(yīng)答或者低應(yīng)答,且一般不能誘導(dǎo)細(xì)胞免疫應(yīng)答。研制能克服現(xiàn)有乙肝疫苗缺陷的新型乙肝疫苗已成為一項(xiàng)迫切的研究課題。研究表明,在主蛋白抗原S的基礎(chǔ)上增加額外的HBV表面抗原能夠增強(qiáng)免疫原性,含前S蛋白的重組乙型肝炎疫苗是第三代乙肝疫苗研發(fā)的重點(diǎn),有望替代現(xiàn)在廣泛使用的基因工程疫苗。本研究的研究思路是將乙肝病毒S抗原基因和preS1抗原表位（21-47位氨基酸）基因組合形成融合基因,在CHO細(xì)胞中實(shí)現(xiàn)S/preS1的穩(wěn)定高效表達(dá)。本研究采用轉(zhuǎn)錄水平調(diào)控為主、轉(zhuǎn)錄后調(diào)控為輔的表達(dá)載體設(shè)計(jì)思想,將S/preS1基因插入含有克服位置效應(yīng)、細(xì)胞內(nèi)源性強(qiáng)啟動(dòng)子及mRNA運(yùn)輸及穩(wěn)定性調(diào)控元件的真核細(xì)胞表達(dá)載體,成功構(gòu)建表達(dá)乙肝病毒S抗原和preS1抗... 

【文章頁(yè)數(shù)】：64 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
前言
第一部分 高效表達(dá)乙肝表面抗原S/preS1重組CHO細(xì)胞系的構(gòu)建
    1 材料
    2 方法
    3 結(jié)果
        3.1 S/preS1基因表達(dá)載體HMRCHEF53u/Neo-S/preS1的構(gòu)建
        3.2 高效表達(dá)S/preS1 CHO細(xì)胞系的克隆篩選
        3.3 10G6細(xì)胞系表達(dá)S/preS1的抗原性分析
    4 討論
    5 結(jié)論
第二部分 10G6細(xì)胞的生長(zhǎng)和代謝特征
    1 材料
    2 方法
    3 結(jié)果
        3.1 10G6細(xì)胞體外培養(yǎng)的形態(tài)
        3.2 10G6細(xì)胞有血清培養(yǎng)的細(xì)胞生長(zhǎng)與代謝
        3.3 10G6細(xì)胞連續(xù)批次貼壁培養(yǎng)的S/preS1表達(dá)穩(wěn)定性
        3.4 10G6細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)的細(xì)胞生長(zhǎng)和代謝
        3.5 10G6細(xì)胞連續(xù)批次懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞生長(zhǎng)和S/preS1表達(dá)穩(wěn)定性
    4 討論
    5 結(jié)論
第三部分 10G6細(xì)胞系無(wú)血清培養(yǎng)工藝的建立
    1 材料
    2 方法
    3 結(jié)果
        3.1 培養(yǎng)溫度對(duì)10G6細(xì)胞生長(zhǎng)和S/preS1表達(dá)的影響
        3.2 接種密度對(duì)10G6細(xì)胞生長(zhǎng)和S/preS1表達(dá)的影響
        3.3 流加培養(yǎng)基對(duì)10G6細(xì)胞生長(zhǎng)和S/preS1表達(dá)的影響
        3.4 起始流加時(shí)間對(duì)10G6細(xì)胞生長(zhǎng)和S/preS1表達(dá)的影響
        3.5 10G6細(xì)胞在無(wú)血清流加培養(yǎng)中的細(xì)胞生長(zhǎng)和S/preS1表達(dá)
        3.6 10G6細(xì)胞在1L生物反應(yīng)器中流加培養(yǎng)
    4 討論
    5 結(jié)論
總結(jié)
參考文獻(xiàn)
致謝
發(fā)表論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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