丙型肝炎（Hepatitis C）是威脅人類身體健康的重要傳染病,其病原體是丙型肝炎病毒（Hepatitis C virus, HCV）,全球范圍內大約有1.7億人感染了HCV,我國的感染率約為3.2%。HCV感染容易慢性化,慢性丙型肝炎約有20%-30%會在20年內緩慢進展為肝硬化和肝癌,HCV感染成為導致肝癌及終末期肝病的重要原因。HCV的依賴RNA的RNA聚合酶（RdRp）缺乏校對功能,使得RNA在復制過程中錯配率極高,最終導致了HCV基因組中核苷酸突變頻率極高,為基因分型提供了基礎。HCV可分為6個主要基因型,每個基因型又可分為若干亞型,HCV基因型的不同直接影響HCV的致病力和患者對藥物治療的反應性。在靜脈注射吸毒人群中HCV的感染比例極高（15.6%-98.7%）,云南省地處中國西南邊陲,與緬甸、老撾、越南三國接壤,緊鄰世界最大的鴉片種植地“金三角”,是毒品運輸入中國內地的重要節(jié)點,具有大量的吸毒人員。相關調查顯示云南省靜脈注射吸毒人群HCV的感染率接近80%。本研究從昆明市疾病預防控制中心獲得了100份2012年1月至5月期間收集于云南不同地區(qū)吸毒人員的HCV陽性血清樣本... 

【文章來源】：北京協(xié)和醫(yī)學院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章頁數(shù)】：86 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1. 引言
    1.1 HCV的基因組結構及編碼產物
        1.1.1 HCV的基因組結構
        1.1.2 病毒蛋白的結構與功能
    1.2 HCV的傳播途徑
        1.2.1 血液傳播
        1.2.2 性傳播
        1.2.3 垂直傳播
    1.3 HCV基因分型
        1.3.1 HCV的基因分型系統(tǒng)
        1.3.2 全球HCV的流行與進化
        1.3.3 我國靜脈注射吸毒人群中HCV的流行與進化
        1.3.4 HCV基因分型的意義
        1.3.5 HCV基因分型的方法
2. 研究目的及意義
3. 材料和方法
    3.1 血清樣品
    3.2 主要試劑及材料
    3.3 主要儀器設備
    3.4 軟件
    3.5 引物設計及主要參考序列
4. 實驗方法
    4.1 病毒基因組RNA的提取
    4.2 逆轉錄反應獲取HCV cDNA
    4.3 分型區(qū)段的選擇及PCR反應條件摸索
    4.4 PCR擴增HCV C/E1區(qū)的部分序列
    4.5 瓊脂糖凝膠電泳
    4.6 PCR產物的純化
    4.7 受體菌DH5a的感受態(tài)制備
    4.8 純化產物于PMD19-T載體的連接
    4.9 轉化感受態(tài)細胞DH5a
    4.10 陽性重組質粒的提取及鑒定
    4.11 數(shù)據(jù)分析
5. 實驗結果
    5.1 HCV分型擴增區(qū)段地選擇及PCR條件優(yōu)化
    5.2 陽性樣本中HCV RNA的PCR檢測
    5.3 HCV C/E1區(qū)段的PCR擴增
    5.4 PCR產物膠回收、測序用重組載體PMD19-T的構建與鑒定
    5.5 HCV陽性樣本中HCVC/E1區(qū)段測序結果
    5.6 云南省靜脈吸毒人群中HCV的基因型分布
    5.7 云南省靜脈吸毒人群HCV感染亞型的性別及年齡分布
    5.8 云南省靜脈吸毒人群中HCV的基因型分布狀況與其他地區(qū)分布狀況的對比
    5.9 云南省靜脈吸毒人群中現(xiàn)有HCV的基因型分布狀況與早期研究的對比
6. 討論
7. 小結
參考文獻
附錄一 HCV陽性樣品測序序列
附錄二 主要縮略詞表
附錄三 主要溶液配制方法
致謝
研究生簡歷
攻讀碩士期間發(fā)表論文的情況


【參考文獻】：
期刊論文
[1]丙型肝炎病毒基因分型的研究進展[J]. 張瑞,杜紹財.  中華檢驗醫(yī)學雜志. 2006(05)
[2]丙型肝炎病毒傳播研究新進展[J]. 郭振華,景濤.  臨床消化病雜志. 2005(02)
[3]不同感染途徑慢性丙型肝炎患者HCV基因型分布的差異[J]. 謝堯,趙輝,鷗蔚妮,閆杰,杜邵財,徐道振.  中華實驗和臨床病毒學雜志. 2004(03)
[4]中國丙型肝炎病毒基因型研究新進展[J]. 張瑞,杜紹財,邱國華,劉峰,魏來.  中國生物工程雜志. 2004(09)
[5]建立DNA芯片技術檢測丙型肝炎病毒基因型及其初步應用[J]. 毛紅菊,顧士民,趙建龍,劉江霞.  中華實驗和臨床病毒學雜志. 2003(04)
[6]丙型病毒性肝炎與性傳播關系的臨床研究[J]. 王曉鈴,解松剛,楊偉霞.  實用臨床醫(yī)藥雜志. 2003(01)
[7]108例抗-HCV陽性病人流行病學追溯性調查[J]. 趙和平,張玲榮,鄧春青,郭慧安.  中華流行病學雜志. 1997(05)
[8]丙型肝炎病毒傳播途徑的研究進展[J]. 徐杰.  國外醫(yī)學(流行病學傳染病學分冊). 1995(06)



本文編號：3450518