發(fā)布時間：2017-05-03 18:03

  本文關(guān)鍵詞：PrxⅠ在LPS誘導小鼠免疫反應過程中的調(diào)控作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：過氧化物還原酶I (Peroxiredoxin I, Prx I)是細胞內(nèi)清除活性氧（Reactive OxygenSpecies, ROS）的過氧化物酶，是過氧化物還原酶家族（Peroxiredoxin fimaly）成員之一。在過去的20年間人們對其進行了廣泛的研究，已有較為系統(tǒng)的了解。眾多研究結(jié)果顯示PrxⅠ蛋白除了可以清除活性氧之外，還可以與細胞內(nèi)諸多蛋白質(zhì)相互作用，進而在細胞增殖、分化、凋亡、老化、以及癌癥的發(fā)生、發(fā)展方面發(fā)揮重要的調(diào)控作用。近幾年，尤其在肺癌的發(fā)生、發(fā)展和治療過程中PrxⅠ的作用受到了廣大研究工作者的關(guān)注并且取得了系統(tǒng)的了解，但PrxⅠ在免疫反應過程中的調(diào)節(jié)作用和炎癥反應的調(diào)控作用還尚不清楚。為了探究PrxⅠ在免疫反應過程中的新功能，本實驗利用PrxⅠ基因敲除小鼠和野生型小鼠研究PrxⅠ在LPS誘導的敗血性死亡過程中的調(diào)控作用。 實驗首先利用PrxⅠ基因敲除小鼠和野生型小鼠，檢測PrxⅠ基因的缺失在LPS誘導的小鼠死亡上的影響，然后利用組織病理學檢測方法（組織HE染色）找出與小鼠死亡相關(guān)的主要組織臟器，通過蛋白免疫印跡(Western blot)和酶鏈免疫反應（ELISA）等分子生物學檢測技術(shù)，闡明PrxⅠ在LPS誘導的小鼠死亡過程中的保護機制。結(jié)果，在LPS腹腔注射后PrxⅠ基因敲出小鼠與野生型小鼠對比死亡率顯著增加；組織病理學檢測（組織HE染色）發(fā)現(xiàn)PrxⅠ基因敲除小鼠與野生型小鼠對比，LPS腹腔注射后肝臟出現(xiàn)大面積細胞死亡現(xiàn)象；ELISA結(jié)果顯示，，LPS腹腔注射后，PrxⅠ基因敲除小鼠與野生型小鼠對比血清中IL-10的含量明顯降低，肝臟組織上清液中TNF-a的含量顯著升高；Westernblot檢測結(jié)果，LPS腹腔注射后PrxⅠ基因敲除小鼠肝臟組織中促進細胞凋亡蛋白Caspase3表達量明顯上升，同時與ROS相關(guān)的SOD2、Catalase、GPx蛋白質(zhì)的表達量也隨之增加。 以上結(jié)果表明，當機體受到LPS攻擊時，PrxⅠ基因的缺失會顯著增加小鼠的死亡率，并且由于PrxⅠ基因缺失引起的高死亡率直接與肝臟組織的大面積凋亡和肝臟中蓄積的ROS水平有關(guān)。因此，我們認為PrxⅠ作為抗氧化物酶通過抑制肝臟內(nèi)活性氧水平的升高而起到保護機體免受氧化應激引起的損傷，可作為一種敗血性死亡治療劑靶向蛋白。
【關(guān)鍵詞】：脂多糖 過氧化物還原酶Ⅰ 活性氧 炎癥反應 基因敲除小鼠
【學位授予單位】：黑龍江八一農(nóng)墾大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R515.3
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-11
• 第一章 文獻綜述11-21
• 1.1 引言11-12
• 1.2 敗血癥定義12
• 1.3 敗血癥致病機理及研究模型的制作12-14
• 1.4 內(nèi)毒素14-15
• 1.5 Toll 樣受體15-17
• 1.5.1 TLRs 的細胞定位16
• 1.5.2 TLRs 信號通路16-17
• 1.6 過氧化物還原酶（peroxiredoxins）家族17-19
• 1.6.1 PrxⅠ對細胞的保護作用與其他蛋白的相互作用18-19
• 1.6.2 PrxI 與炎癥反應19
• 1.7 研究的意義19-21
• 第二章 實驗材料及方法21-29
• 2.0 材料與方法21
• 2.1 實驗材料21
• 2.1.1 PrxⅠ基因敲除小鼠21
• 2.1.2 小鼠腹腔巨噬細胞獲得21
• 2.2 主要實驗用試劑21-24
• 2.3 主要實驗儀器24
• 2.4 小鼠基因型鑒定（Genotyping）24-25
• 2.4.1 DNA 提取24-25
• 2.4.2 PCR 反應25
• 2.4.3 瓊脂糖凝膠電泳25
• 2.5 小鼠組織的 HE 染色25-26
• 2.5.1 試驗樣品獲得25
• 2.5.2 HE 染色25-26
• 2.6 ELISA（試劑盒）方法檢測細胞因子26-27
• 2.6.1 樣品獲取26
• 2.6.2 ELISA 試劑盒（夾心 ELISA）檢測26-27
• 2.7 格里斯試劑檢測 NO 濃度27
• 2.7.1 Griess 試劑的配制27
• 2.7.2 標準曲線制備27
• 2.8 流式細胞儀檢測脾臟中 T cell27-28
• 2.8.1 脾臟細胞獲取27
• 2.8.2 脾臟細胞熒光染色27-28
• 2.9 免疫印跡（Western blotting）檢測蛋白表達變化28-29
• 2.9.1 組織蛋白樣品收集28
• 2.9.2 組織蛋白濃度測量28-29
• 第三章 實驗結(jié)果29-39
• 3.1 小鼠基因型的鑒定29
• 3.2 LPS 腹腔注射后，PrxⅠ基因敲除小鼠與野生型小鼠對比死亡率升高29-30
• 3.3 小鼠腹腔炎性細胞 ROS 水平和細胞數(shù)量變化30-32
• 3.4 流式細胞術(shù)分析脾臟淋巴細胞32-33
• 3.5 外周血細胞因子分析33-34
• 3.6 LPS 誘導小鼠死亡組織病理分析34-35
• 3.7 LPS 處理后肝臟細胞間細胞因子變化35-36
• 3.8 LPS 處理后肝臟細胞內(nèi)凋亡信號分析36-37
• 3.9 LPS 處理后肝臟細胞內(nèi) ROS 相關(guān)蛋白分析37-39
• 第四章 討論39-43
• 第五章 結(jié)論43-45
• 參考文獻45-49
• 附錄49-53
• 致謝53-55
• 個人簡歷55

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 付永鋒,樊廷俊;Bcl-2家族蛋白與細胞凋亡[J];生物化學與生物物理學報;2002年04期

2 王筱冰;張小翠;夏妙紅;劉全宏;;Caspase的活化機制[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學進展;2006年03期

  本文關(guān)鍵詞：PrxⅠ在LPS誘導小鼠免疫反應過程中的調(diào)控作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：343461