目的:建立核酸序列依賴擴增技術（NASBA）檢測隱球菌RNA的方法,提高隱球菌感染診斷的準確性。方法:設計一對具有隱球菌屬特異性的引物,構建NASBA擴增隱球菌RNA的方法并評價該方法的靈敏度和特異性。按歐洲癌癥研究和治療組織/侵襲性真菌感染協作組和美國變態(tài)反應和感染病研究院真菌病研究組（EORTC/MSG）2008年修訂的侵襲性真菌病定義標準收集隱球菌感染的陽性病例和排除隱球菌感染的陰性病例,分別應用隱球菌莢膜多糖抗原檢測（膠體金法）、PCR及本研究建立的NASBA方法進行檢測。應用配對診斷試驗設計、McNemar檢驗分別對3種方法進行比較以評價其診斷效能。結果:NASBA產物電泳結果顯示僅新型隱球菌RNA擴增產物出現了特異性條帶,而其他對照菌（煙曲霉、串珠鐮刀菌、金黃色葡萄球、銅綠假單胞菌、大腸埃希菌、白色念珠菌、近平滑念珠菌）均沒有出現電泳條帶;NASBA結合電泳檢測結果表明該方法靈敏度可達10 cfu/mL。NASBA、莢膜多糖抗原膠體金法及PCR靈敏度分別是87.5%（95%CI=66.53%～96.71%）、100%（95%CI=82.83%～100%）、66.67%（95... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學學報. 2020,45(06)北大核心CSCD

【文章頁數】：5 頁

【部分圖文】：

不同菌種NASBA擴增后電泳結果

NASBA擴增106 cfu/mL、105 cfu/mL、104 cfu/mL濃度隱球菌孢子數菌懸液提取的RNA，及其倍比稀釋后的相當于孢子濃度分別為103 cfu/m L、102 cfu/m L、101 cfu/m L和100 cfu/m L的RNA，經電泳方法檢測結果發(fā)現RNA對應的孢子濃度為10 cfu/mL仍有陽性條帶，推斷該方法靈敏度可達10 cfu/mL（圖3）。2.4 NABSA檢測的性能評價

NASBA擴增產物的凝膠電泳結果表明，新型隱球菌RNA擴增出約229 bp的片段，陰性對照無特異性的擴增片段。擴增產物RNA基因測序結果經BLAST站點進行序列比對，與新型隱球菌標準菌株H99的CAP10序列一致（圖1）。2.2 特異性分析


本文編號：3367967