云南鼠疫自然疫源地野外小型獸類嗜吞噬細胞無形體感染調(diào)查
發(fā)布時間：2021-08-26 11:14
目的明確云南鼠疫自然疫源地野外小型獸類自然感染嗜吞噬細胞無形體狀況及多種因素對野外小型獸類感染嗜吞噬細胞無形體的影響,探討云南鼠疫自然疫源地嗜吞噬細胞無形體流行株基因多態(tài)性,為疾病防控提供科學依據(jù)。方法1.樣本來源本研究于云南鼠疫自然疫源地捕獲野外小型獸類2611只,對捕獲的野外小型獸類進行肝、脾臟器樣本采集,共獲得2549份肝、脾臟器樣本,通過分層抽樣,1605份樣本作為本次實驗檢測對象。2.DNA提取按照磁珠法微量細胞/組織基因組DNA提取試劑盒說明書的操作步驟對野外小型獸類肝、脾臟器樣本進行DNA提取,通過核酸濃度測定儀NanoDrop-1000對提取的樣本DNA進行檢測,不符合標準的樣本DNA重新進行提取,對符合標準的樣本DNA進行PCR擴增。3.PCR擴增采用巢式PCR進行嗜吞噬細胞無形體16SrRNA基因片段擴增,采用實時熒光定量PCR進行嗜吞噬細胞無形體gltA基因片段擴增。4.基因序列測定和系統(tǒng)進化樹分析將測序成功的樣本基因序列片段通過登陸網(wǎng)站（https://blast.ncbi.nlm.nih.gov）利用BLAST中的“Sequence Similarity Se...
【文章來源】：大理大學云南省
【文章頁數(shù)】：68 頁
【學位級別】：碩士
【部分圖文】：
云南鼠疫自然疫源地采樣點分布圖
材料與方法4.4.2 實時熒光定量 PCR 結(jié)果判定將嗜吞噬細胞無形體質(zhì)粒標準品進行 10 倍濃度稀釋（100～106拷貝數(shù)/uL），通過 6 次重復實驗（每次實驗各濃度設置 6 個平行孔），分析實驗結(jié)果并制成標準曲線，確定拷貝數(shù)最低且穩(wěn)定的 Cq 值定為檢測閾值。本實驗采用栗冬梅等[51]的測定結(jié)果，將檢測閾值定于 Cq＜35（100 拷貝數(shù)/uL）。當被測樣本 Cq 值均數(shù)小于 35 且平行孔擴增結(jié)果差異小，擴增結(jié)果圖中陽性對照起峰而空白對照未起峰時（見圖 3），結(jié)果判定為疑似陽性，并送至測序公司進行測序；為防止污染造成的假陽性結(jié)果，反應體系配置，PCR 擴增在不同區(qū)域進行。
擴增產(chǎn)物長度為 389bp；對擴增產(chǎn)物進行 1.5%瓊脂糖凝膠電泳，出現(xiàn)目的條帶的位置符合預計位置（見圖4 和圖 5）。注：Marker 分子量為 700bp，自上而下依次為 700bp、600bp、500bp、400bp、300bp、200bp、100bp；M 為 DNAMarker ；PC 為陽性對照 ；NC 為陰性對照；YL-3-131 至 LH-4-165 號為陽性擴增產(chǎn)物。圖 4 嗜吞噬細胞無形體巢式 PCR 第一輪擴增結(jié)果注：Marker 分子量為 700bp，自上而下依次為 700bp、600bp、500bp、400bp、300bp、200bp、100bp；M 為 DNAmarker ；PC 為陽性對照 ；NC 為陰性對照；YL-3-131 至 LH-4-165 號為陽性擴增產(chǎn)物。圖 5 嗜吞噬細胞無形體巢式 PCR 第二輪擴增結(jié)果
【參考文獻】：
期刊論文
[1]應用TaqMan探針實時熒光定量PCR法調(diào)查北京市部分城郊區(qū)鼠傳病原體流行狀況[J]. 栗冬梅,徐兆楠,朱彩英,張政,康央,張洪江,宋秀平,唐承軍,葛軍旗. 中國媒介生物學及控制雜志. 2019(01)
[2]中國人粒細胞無形體病流行現(xiàn)狀及其影響因素[J]. 張宏澤,尹家祥. 中國人獸共患病學報. 2018(05)
[3]嗜吞噬細胞無形體病分子生物學診斷方法的研究進展[J]. 李紅旺,劉士煌,吳保義,金春梅,于龍政. 吉林畜牧獸醫(yī). 2017(07)
[4]云南省玉龍鼠疫疫源地蚤類群落結(jié)構(gòu)與物種多樣性[J]. 湯麗,張長國,邵宗體,段興德,浦恩念,劉正祥,蘇超,宋志忠,高子厚. 中國媒介生物學及控制雜志. 2017(03)
[5]嗜吞噬細胞無形體在不同組織細胞間抗原差異研究[J]. 高娃,殷旭紅,郭生春,烏蘭圖雅,曹民治. 中國媒介生物學及控制雜志. 2017(03)
[6]北京東北部山區(qū)人群嗜吞噬細胞無形體血清流行病學調(diào)查[J]. 呂燕寧,竇相峰,陳麗娟,孫玉蘭,張秀春,關(guān)增智,黎新宇,王全意. 中國人獸共患病學報. 2016(10)
[7]山東沂源硬蜱攜帶無形體的調(diào)查及進化分析[J]. 劉相葉,武志強,劉轉(zhuǎn)轉(zhuǎn),湯仁仙,顏超,鄭葵陽. 動物醫(yī)學進展. 2015(12)
[8]云南省鼠疫自然疫源地研究現(xiàn)況[J]. 魏兆飛,尹家祥. 疾病預防控制通報. 2015(06)
[9]嗜吞噬細胞無形體對宿主細胞影響研究進展[J]. 張艷,寧長申. 動物醫(yī)學進展. 2015(05)
[10]吉林省延邊地區(qū)自然生境內(nèi)蜱種類的調(diào)查[J]. 于龍政,海旭南,許應天,崔明勛,梁晚楓,金春梅,張守發(fā). 國際醫(yī)學寄生蟲病雜志. 2015 (01)
博士論文
[1]嗜吞噬細胞無形體及其復合感染的調(diào)查與實驗研究[D]. 崔曉鳴.中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院 2016
碩士論文
[1]三株嗜吞噬細胞無形體AnkA蛋白原核表達及免疫原性差異性研究[D]. 姚娜.石河子大學 2013
本文編號：3364138
【文章來源】：大理大學云南省
【文章頁數(shù)】：68 頁
【學位級別】：碩士
【部分圖文】：
云南鼠疫自然疫源地采樣點分布圖
材料與方法4.4.2 實時熒光定量 PCR 結(jié)果判定將嗜吞噬細胞無形體質(zhì)粒標準品進行 10 倍濃度稀釋（100～106拷貝數(shù)/uL），通過 6 次重復實驗（每次實驗各濃度設置 6 個平行孔），分析實驗結(jié)果并制成標準曲線，確定拷貝數(shù)最低且穩(wěn)定的 Cq 值定為檢測閾值。本實驗采用栗冬梅等[51]的測定結(jié)果，將檢測閾值定于 Cq＜35（100 拷貝數(shù)/uL）。當被測樣本 Cq 值均數(shù)小于 35 且平行孔擴增結(jié)果差異小，擴增結(jié)果圖中陽性對照起峰而空白對照未起峰時（見圖 3），結(jié)果判定為疑似陽性，并送至測序公司進行測序；為防止污染造成的假陽性結(jié)果，反應體系配置，PCR 擴增在不同區(qū)域進行。
擴增產(chǎn)物長度為 389bp；對擴增產(chǎn)物進行 1.5%瓊脂糖凝膠電泳，出現(xiàn)目的條帶的位置符合預計位置（見圖4 和圖 5）。注：Marker 分子量為 700bp，自上而下依次為 700bp、600bp、500bp、400bp、300bp、200bp、100bp；M 為 DNAMarker ；PC 為陽性對照 ；NC 為陰性對照；YL-3-131 至 LH-4-165 號為陽性擴增產(chǎn)物。圖 4 嗜吞噬細胞無形體巢式 PCR 第一輪擴增結(jié)果注：Marker 分子量為 700bp，自上而下依次為 700bp、600bp、500bp、400bp、300bp、200bp、100bp；M 為 DNAmarker ；PC 為陽性對照 ；NC 為陰性對照；YL-3-131 至 LH-4-165 號為陽性擴增產(chǎn)物。圖 5 嗜吞噬細胞無形體巢式 PCR 第二輪擴增結(jié)果
【參考文獻】：
期刊論文
[1]應用TaqMan探針實時熒光定量PCR法調(diào)查北京市部分城郊區(qū)鼠傳病原體流行狀況[J]. 栗冬梅,徐兆楠,朱彩英,張政,康央,張洪江,宋秀平,唐承軍,葛軍旗. 中國媒介生物學及控制雜志. 2019(01)
[2]中國人粒細胞無形體病流行現(xiàn)狀及其影響因素[J]. 張宏澤,尹家祥. 中國人獸共患病學報. 2018(05)
[3]嗜吞噬細胞無形體病分子生物學診斷方法的研究進展[J]. 李紅旺,劉士煌,吳保義,金春梅,于龍政. 吉林畜牧獸醫(yī). 2017(07)
[4]云南省玉龍鼠疫疫源地蚤類群落結(jié)構(gòu)與物種多樣性[J]. 湯麗,張長國,邵宗體,段興德,浦恩念,劉正祥,蘇超,宋志忠,高子厚. 中國媒介生物學及控制雜志. 2017(03)
[5]嗜吞噬細胞無形體在不同組織細胞間抗原差異研究[J]. 高娃,殷旭紅,郭生春,烏蘭圖雅,曹民治. 中國媒介生物學及控制雜志. 2017(03)
[6]北京東北部山區(qū)人群嗜吞噬細胞無形體血清流行病學調(diào)查[J]. 呂燕寧,竇相峰,陳麗娟,孫玉蘭,張秀春,關(guān)增智,黎新宇,王全意. 中國人獸共患病學報. 2016(10)
[7]山東沂源硬蜱攜帶無形體的調(diào)查及進化分析[J]. 劉相葉,武志強,劉轉(zhuǎn)轉(zhuǎn),湯仁仙,顏超,鄭葵陽. 動物醫(yī)學進展. 2015(12)
[8]云南省鼠疫自然疫源地研究現(xiàn)況[J]. 魏兆飛,尹家祥. 疾病預防控制通報. 2015(06)
[9]嗜吞噬細胞無形體對宿主細胞影響研究進展[J]. 張艷,寧長申. 動物醫(yī)學進展. 2015(05)
[10]吉林省延邊地區(qū)自然生境內(nèi)蜱種類的調(diào)查[J]. 于龍政,海旭南,許應天,崔明勛,梁晚楓,金春梅,張守發(fā). 國際醫(yī)學寄生蟲病雜志. 2015 (01)
博士論文
[1]嗜吞噬細胞無形體及其復合感染的調(diào)查與實驗研究[D]. 崔曉鳴.中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院 2016
碩士論文
[1]三株嗜吞噬細胞無形體AnkA蛋白原核表達及免疫原性差異性研究[D]. 姚娜.石河子大學 2013
本文編號：3364138
本文鏈接：http://www.sikaile.net/yixuelunwen/chuanranbingxuelunwen/3364138.html
最近更新
教材專著
