目的驗證結核分枝桿菌（Mycobacterium tuberculosis, Mtb）基因Rv2626c編碼的低氧反應蛋白1（hypoxic response protein 1, HRP1）為分泌蛋白。方法從Mtb H37Rv標準毒力株基因組上擴增目的基因并添加His標簽;運用擴增產物構建重組質粒,電轉入恥垢分枝桿菌（Mycobacterium smegmatis, Ms）（MC2 155）構建重組菌;熱誘導重組菌表達蛋白,檢測培養(yǎng)濾液及細菌裂解液中蛋白的表達情況,將10 kDa培養(yǎng)濾液抗原（CFP-10）（Ms）和CFP-10（Mtb）設為陽性對照,將胞質蛋白熱休克蛋白65（GroEL2）（Mtb）作為陰性對照。結果 PCR成功擴增HRP1、GroEL2（Mtb）、CFP-10（Mtb）、CFP-10（Ms）,并且重組質粒測序峰單一且信號穩(wěn)定,鑒定重組質粒構建成功。成功構建重組Ms并實現(xiàn)蛋白GroEL2（Mtb）、CFP-10（Mtb）、CFP-10（Ms）、HRP1在Ms中的表達。在重組菌裂解液中和培養(yǎng)基濾液中均檢測到目標蛋白HRP1;結果與陽性對照CFP-10一致;陰性對照Gr... 

【文章來源】：四川大學學報(醫(yī)學版). 2020,51(05)北大核心CSCD

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