本文關鍵詞：結核與非結核分枝桿菌感染者血漿差異表達microRNA的初步篩選與功能分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的結核分枝桿菌(tuberculosismycobacterium,MTB)與非結核分枝桿菌(nontuberculosismycobacterium,NTM)感染肺部疾病患者相比,NTM感染的肺部疾病患者血漿中差異表達micro RNA(mi RNA)的篩選及驗證,并對差異表達mi RNA調(diào)控的靶基因及其參與的生物學功能進行分析。方法1研究對象選擇:收集唐山市第四醫(yī)院與石家莊第五醫(yī)院2013.10-2014.10期間就診的符合要求的NTM感染肺部疾病患者19例作為NTM組,MTB感染肺部疾病患者37例作為MTB組,取得研究對象知情同意后取其血漿標本并進行一般情況調(diào)查。從每組中各選取6例研究對象用于芯片篩選;其余研究對象用于Real-time PCR(RT-q PCR)驗證。2 NTM感染患者血漿中差異表達mi RNA篩選及驗證:(1)采用Taq Man低密度芯片技術檢測mi RNA的表達水平,根據(jù)校正后的兩個樣本間雜交信號強度的比值進行選擇,比值大于1.8表示差異表達上調(diào),小于0.7表示差異表達下調(diào)。(2)采用RT-q PCR技術驗證芯片篩選結果,兩組間mi RNA表達水平的比較采用兩獨立樣本的t檢驗,以P0.05為統(tǒng)計學顯著性差異標準。兩組差異表達mi RNA的相對表達量用2-△△Ct方法進行計算,2-△△Ct大于1表示表達上調(diào),2-△△Ct小于1表示表達下調(diào)。3差異表達mi RNA靶基因的預測及功能分析:通過mi Randa、Target Scan和mi Rwalk三個數(shù)據(jù)庫聯(lián)合對NTM組差異表達mi RNA的靶基因進行預測�；贕ene Ontology數(shù)據(jù)庫對靶基因進行功能預測,利用Fisher精確檢驗的統(tǒng)計方法計算每個GO中靶基因的顯著性,以P-value0.05作為判斷標準。4統(tǒng)計學分析方法:對研究對象一般情況采用SPSS17.0進行統(tǒng)計分析,其中年齡變量采用兩獨立樣本t檢驗,分類資料采用兩獨立樣本2c檢驗,以P0.05為統(tǒng)計學顯著性差異標準。結果1 NTM組差異表達mi RNA篩選及RT-qPCR驗證:(1)NTM組差異表達mi RNA篩選:根據(jù)以下三個標準,本研究共篩選出差異表達mi RNA 11個,包括上調(diào)mi RNA 8個,分別為hsa-mi R-26a,hsa-mi R-24,hsa-mi R-222,hsa-mi R-191,hsa-mi R-155,hsa-mi R-126,hsa-mi R-122,hsa-let-7b;下調(diào)mi RNA 3個,分別為hsa-mi R-767-3p、hsa-mi R-1283、hsa-mi R-1281。篩選標準:①芯片初步篩選中上調(diào)或下調(diào)倍數(shù)較大的mi RNA;②參考既往各種感染性疾病中相關mi RNA研究報道;③被Target Scan、mi Rwalk和mi Randa databases數(shù)據(jù)庫同時驗證過,且在調(diào)控網(wǎng)絡中功能較為突出。(2)RT-q PCR驗證結果:結合芯片篩選結果及以往研究報道,選取其中上調(diào)倍數(shù)最大的3個mi RNA和全部3個下調(diào)mi RNA進行驗證,分別為has-let-7b、has-mi R-155、has-mi R-26a、has-mi R-1281、has-mi R-1283、hasmi R-767。RT-q PCR驗證結果與芯片篩選結果一致。2靶基因預測及功能分析:(1)上調(diào)的mi RNA調(diào)控了關鍵基因23個;下調(diào)的mi RNA調(diào)控了關鍵基因59個。主要調(diào)控以下三方面的生物學功能:①通過固有免疫應答和調(diào)控噬菌溶酶體對病菌的吞噬作用而參與炎性反應的調(diào)節(jié);②通過相關信號通路影響細胞周期而誘導細胞凋亡影響疾病的進程;③通過調(diào)控細胞的浸潤轉移影響NTM患病的進展。(2)靶基因Gene Ontology分析結果:8個上調(diào)的mi RNA主要調(diào)節(jié)42個信號功能通路,主要通過調(diào)控蛋白激酶和糖質(zhì)新生等過程參與炎癥反應;3個下調(diào)mi RNA主要調(diào)節(jié)8個信號功能通路,主要通過調(diào)控代謝通路及信號轉導通路參與細胞凋亡等過程。結論1與MTB感染組比較,NTM組感染者血漿中存在11個差異表達mi RNA,其中8個上調(diào)mi RNA,3個下調(diào)mi RNA。2 NTM組差異表達mi RNA主要參與調(diào)控炎性反應、細胞凋亡和細胞的浸潤轉移。
【關鍵詞】：microRNA NTM MTB 基因芯片 功能分析
【學位授予單位】：華北理工大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R52
【目錄】：

• 摘要4-6
• abstract6-10
• 引言10-12
• 第1章 結核與非結核分枝桿菌感染者血漿差異表達micro RNA的初步篩選與功能分析12-45
• 1.1 研究內(nèi)容與方法12-17
• 1.1.1 主要材料12
• 1.1.2 研究對象的選擇及血漿標本的選取12-13
• 1.1.3 差異表達mi RNA篩選及驗證13-16
• 1.1.4 靶基因預測及功能分析16-17
• 1.1.5 統(tǒng)計分析17
• 1.2 結果17-31
• 1.2.1 研究對象一般情況17-18
• 1.2.2 差異表達mi RNA篩選結果及驗證18-24
• 1.2.3 差異表達mi RNA靶基因預測分析24-31
• 1.3 討論31-39
• 1.4 小結39
• 參考文獻39-45
• 第2章 綜述45-56
• 2.1 NTM和MTB流行現(xiàn)況及診斷研究進展46-48
• 2.1.1 分枝桿菌感染肺部疾病流行現(xiàn)狀46-47
• 2.1.2 分枝桿菌檢測方法研究現(xiàn)況47-48
• 2.2 MTB感染結核病與NTM結核分枝桿菌鑒別診斷研究現(xiàn)況48-49
• 2.3 mi RNA及其在疾病診斷中的應用49-50
• 2.3.1 mi RNA的生物學功能49
• 2.3.2 mi RNA作為疾病診斷的生物標志物的優(yōu)勢49-50
• 2.4 mi RNA在MTB和NTM感染肺病診斷中的應用50-52
• 參考文獻52-56
• 結論56-57
• 致謝57-58
• 導師簡介58-59
• 作者簡介59-60
• 學位論文數(shù)據(jù)集60

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 陳菲菲;王春芳;錢愛東;;非結核性分支桿菌的致病性及其鑒定方法[J];中國畜牧獸醫(yī);2013年01期

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  本文關鍵詞：結核與非結核分枝桿菌感染者血漿差異表達microRNA的初步篩選與功能分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：302521