乙型肝炎（hepatitis B）是由乙型肝炎病毒（HBV）引起的,以肝臟炎性病變?yōu)橹?并能引起其他多器官病變的疾病。部分乙肝患者轉化為肝硬化及肝癌,嚴重威脅生命健康。文獻報道,HBV感染可以引起肝細胞發(fā)生內質網(wǎng)ER（endoplasmic reticulum,ER）應激,而ER應激會激活非折疊蛋白反應（unfolded protein response,UPR）。MANF（Mesencephalic Astrocyte-derived Neurotrophic Factor）是一種對ER應激敏感的蛋白,在ER應激時特異性高表達。MANF在細胞中起著保護細胞避免ER應激導致的細胞凋亡。我們的發(fā)現(xiàn)發(fā)現(xiàn),MANF的啟動子區(qū)存在ER應激反應元件,但UPR分支信號如何影響MANF的表達目前還不清楚。本研究主要觀察HBV誘導的肝組織的ER應激以及UPR分支通路對MANF表達的影響。結果如下:（1）通過對收集的肝炎病人組織切片免疫組化及肝炎病人組織Q-PCR方法檢測,發(fā)現(xiàn)ER應激主要標志蛋白BIP,CHOP的的表達上調,且表達水平隨著肝炎的病程進展逐漸升高。（2）采用免疫組化及Q-PCR方法對肝炎... 

【文章來源】：安徽醫(yī)科大學安徽省

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
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Abstract
1. 前言
2. 實驗材料
    2.1 細胞株
    2.2 標本收集
    2.3 抗體
    2.4 實驗用引物以及si RNA設計
    2.5 實驗用試劑
    2.6 實驗儀器
3. 實驗方法
    3.1 免疫組化
    3.2 實時熒光定量PCR
        3.2.1 RNA的提取
        3.2.2 RNA的逆轉錄
        3.2.3 QPCR試驗方法的建立
    3.3 免疫熒光雙標
    3.4 免疫共沉淀（co-ip）
        3.4.1 裂解細胞
        3.4.2 耦聯(lián)抗體
        3.4.3 CO-IP
    3.5 染色質免疫共沉淀
        3.5.1 交聯(lián)和細胞分離
        3.5.2 染色質斷裂
        3.5.3 免疫共沉淀實驗
        3.5.4 IP洗脫
        3.5.5 DNA恢復
        3.5.6 PCR檢測
    3.6 免疫印跡實驗
        3.6.1 蛋白樣品的制備
        3.6.2 SDS-PAGE凝膠電泳
    3.7 細胞轉染
    3.8 肝炎病人組織標本的收集
    3.9 統(tǒng)計學分析
4. 實驗結果
    4.1 乙肝病人肝組織中BIP的表達
    4.2 乙肝病人肝組織中CHOP的表達
    4.3 乙肝病人肝組織中MANF的表達
    4.4 乙肝病人肝組織中XBP1的表達
    4.5 MANF和XBP1/XBP1s在肝炎組織中的共表達
    4.6 MANF與XBP1在細胞內相互作用
    4.7 XBP1s在MANF的轉錄調控中起關鍵作用
    4.8 抑制IRE1α 核酸酶活性降低MANF的表達
    4.9 XBP1與MANF基因啟動子序列相互作用
5.討論
6. 結論
7.參考文獻
附錄
致謝
綜述
    參考文獻


【參考文獻】：
期刊論文
[1]人中腦星形膠質來源的神經(jīng)營養(yǎng)因子基因啟動子區(qū)域的克隆及活性檢測[J]. 張利,陸鵬,王濤,沈玉先.  中國藥理學通報. 2012(06)



本文編號：3014541