目的:建立效率高的、靈敏的針對溶瘤2型單純皰疹病毒（Oncolytic herpes simplex virus type 2,oHSV2）的熒光定量PCR方法,依據(jù)中國藥典的方法學(xué)驗證指導(dǎo)原則對該PCR方法進(jìn)行初步的驗證,并檢測給藥后小鼠腫瘤組織內(nèi)粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子（granulocyte-macrophage colonystimulation factor,GM-CSF）的表達(dá)。方法:（1）分析oHSV2的全基因組序列,根據(jù)它的GM-CSF基因片段,登錄Beacon Designer8.0軟件設(shè)計一對特異性高的引物。提取前期已經(jīng)重組好的陽性質(zhì)粒pHG52d34.5CMVhGM-CSF,超微量分光光度計測定該質(zhì)粒的濃度,并根據(jù)公式換算成拷貝數(shù),將其梯度稀釋為熒光定量PCR的模板。建立標(biāo)準(zhǔn)曲線,做該方法的特異性、敏感性和重復(fù)性試驗。（2）采集捐獻(xiàn)者的血液和尿液,與10³、10⁴、10^5.5、10^6.5 copies/μL pHG52d34.5CMVhGM-CSF混合后用QIAamp DN... 

【文章來源】：湖北科技學(xué)院湖北省

【文章頁數(shù)】：49 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

SYBRGreenRealtimePCR特異性結(jié)果

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
[1]番茄斑萎病毒實時熒光定量PCR快速檢測方法的建立[D]. 習(xí)鳳妮.中南大學(xué) 2013
[2]葡萄根瘤蚜的熒光定量PCR檢測及間種植物防控研究[D]. 郭慶.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2011
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本文編號：2927390