目的乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染在全世界流行,在非洲和亞洲地區(qū)感染流行率最高。最新流行病學(xué)調(diào)查顯示有20億人曾感染HBV,其中2.4億人為慢性HBV感染者,每年約有65萬人死于HBV感染所致的肝衰竭、肝硬化和肝細(xì)胞癌(Hepatocellular Carcinoma,HCC)。乙型肝炎病毒的慢性感染是病毒復(fù)制和受損的宿主免疫力相互作用的結(jié)果。由于乙型肝炎病毒感染者固有免疫和適應(yīng)性免疫系統(tǒng)受損,不能有效地對病毒產(chǎn)生效應(yīng),導(dǎo)致持續(xù)性的慢性病毒感染。固有免疫在HBV急性感染期發(fā)揮瞬時(shí)作用,并誘導(dǎo)后續(xù)的特異性免疫應(yīng)答。自然殺傷細(xì)胞(nature killer cells,NK Cells)是固有免疫清除細(xì)胞內(nèi)病原體和異常細(xì)胞的重要病毒應(yīng)答細(xì)胞,它主要通過分泌細(xì)胞因子和殺傷功能發(fā)揮作用。殺傷細(xì)胞凝集素樣受體亞家族G成員1(Killer cell lectin-like receptor subfamily G member 1,KLRG1)首先發(fā)現(xiàn)于大鼠粘膜型肥大細(xì)胞株RBL-2H3上,被認(rèn)為是一種抑制炎癥介質(zhì)釋放的受體。在人體中KLRG1受體主要在NK細(xì)胞和T細(xì)胞上表達(dá)。有文獻(xiàn)報(bào)道在丙肝病人外周血NK細(xì)胞上的KLRG1受體表達(dá)會(huì)促進(jìn)NK細(xì)胞數(shù)量減少和功能受損,其機(jī)制主要是抑制NK細(xì)胞的增殖、促進(jìn)NK細(xì)胞的凋亡和減少NK細(xì)胞炎癥細(xì)胞因子的釋放。本研究旨在探求在慢性乙型肝炎病毒感染中KLRG1受體的表達(dá)對NK細(xì)胞功能的影響。方法1.從120名慢性乙型肝炎病毒感染者和19名健康人外周血中提取單個(gè)核細(xì)胞(Peripheral Blood Mononuclear Cell,PBMC)使用流式細(xì)胞儀檢測NK細(xì)胞在淋巴細(xì)胞中的比例和KLRG1~+NK細(xì)胞比例;2.在體外用丙二醇甲醚醋酸酯(PMA)和離子霉素刺激HBV感染者和健康對照的PBMC,分別檢測外周血PBMC中表達(dá)IFN-γ的NK細(xì)胞頻數(shù)。3.分析外周血PBMC中NK細(xì)胞上KLRG1表達(dá)與IFN-γ分泌量的相關(guān)性。結(jié)果1.外周血中NK細(xì)胞頻數(shù)檢測:通過流式細(xì)胞儀檢測慢性乙型肝炎病毒感染者(120例)和健康對照組(19例)外周血淋巴細(xì)胞中NK細(xì)胞的比例,分析結(jié)果表明HBV感染組NK細(xì)胞頻數(shù)(16.92±7.9%)與健康對照組(10.57±6.5%)沒有明顯差異(P=0.3297)。2.外周血中KLRG1+NK細(xì)胞頻數(shù)的分析:通過流式細(xì)胞儀檢測慢性乙型肝炎病毒感染者(120例)和健康對照組(19例)外周血PBMC中KLRG1+NK細(xì)胞的比例,發(fā)現(xiàn)HBV感染組KLRG1~+NK細(xì)胞比例(49.43±21.2%)明顯高于健康對照組(31.60±17.9%),兩組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.001);3.外周血PBMC中分泌IFN-γ的NK細(xì)胞頻數(shù)分析:檢測慢性乙型肝炎病毒感染者(28例)與健康對照組(12例)外周血PBMC中分泌IFN-γ的NK細(xì)胞頻數(shù),發(fā)現(xiàn)HBV感染組外周血PBMC中分泌IFN-γ的NK細(xì)胞頻數(shù)明顯少于健康對照組(t=4.801,P0.0001)。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)對照組中分泌IFN-γ的NK細(xì)胞頻數(shù),KLRG1~+NK細(xì)胞明顯少于KLRG1~-NK細(xì)胞(t=8.586,P0.0001);在HBV感染組中分泌IFN-γ的NK細(xì)胞頻數(shù),KLRG1~+NK細(xì)胞也明顯少于KLRG1~-NK細(xì)胞(t=4.801,P0.0001)。與對照組比較,HBV感染組中分泌IFN-γ的KLRG1~+NK細(xì)胞頻數(shù)、KLRG1~-NK細(xì)胞頻數(shù)均明顯降低(t=2.753,P=0.009;t=6.391,P0.0001)。4.HBV感染者外周血PBMC中NK細(xì)胞上KLRG1表達(dá)與IFN-γ分泌量的相關(guān)性分析:為了進(jìn)一步闡明NK細(xì)胞上KLRG1表達(dá)與IFN-γ分泌量之間的關(guān)系,用GraphPad Prism 6.03軟件分析了兩組變量的相關(guān)性,結(jié)果顯示感染者外周血PBMC中NK細(xì)胞上KLRG1表達(dá)與IFN-γ分泌量呈現(xiàn)明顯的負(fù)相關(guān)關(guān)系(相關(guān)系數(shù)=-0.5470,P=0.0026)。結(jié)論乙型肝炎病毒感染可增加NK細(xì)胞KLRG1的表達(dá),并且進(jìn)一步減少NK細(xì)胞中IFN-γ分泌,可能是造成HBV慢性感染的要素。
【學(xué)位單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R512.62
【部分圖文】：

2.外周血中 KLRG1+NK 細(xì)胞頻數(shù)的分析：通過流式細(xì)胞儀檢測慢性乙型肝炎病毒感染者（120 例）和健康對照組（19 例）外周血 PBMC 中 KLRG1+NK 細(xì)胞的比例，發(fā)現(xiàn) HBV 感染組 KLRG1+NK 細(xì)胞比例（49.43±21.2%）明顯高于健康對照組（31.60±17.9%），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001）。見圖 2。圖 1 外周血中 NK 細(xì)胞頻數(shù)的檢測。（A）NK 細(xì)胞的圈門策略;（B）HBV 感染組與健康對照組 NK 細(xì)胞頻數(shù)的比較。Figure 1 Detection of NK cell frequency in peripheral blood. (A) Circulatorystrategy of NK cells; (B) Comparison of NK cell frequency between HBV infectedgroup and healthy control group.A B

2.外周血中 KLRG1+NK 細(xì)胞頻數(shù)的分析：通過流式細(xì)胞儀檢測慢性乙型肝炎病毒感染者（120 例）和健康對照組（19 例）外周血 PBMC 中 KLRG1+NK 細(xì)胞的比例，發(fā)現(xiàn) HBV 感染組 KLRG1+NK 細(xì)胞比例（49.43±21.2%）明顯高于健康對照組（31.60±17.9%），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001）。見圖 2。圖 1 外周血中 NK 細(xì)胞頻數(shù)的檢測。（A）NK 細(xì)胞的圈門策略;（B）HBV 感染組與健康對照組 NK 細(xì)胞頻數(shù)的比較。Figure 1 Detection of NK cell frequency in peripheral blood. (A) Circulatorystrategy of NK cells; (B) Comparison of NK cell frequency between HBV infectedgroup and healthy control group.A B

對照組 12 5.96±2.4HBV 感染組 28 2.59±1.0統(tǒng)計(jì)量值 t=2.753P 值 P=0.009組別 例數(shù) 分泌 IFN-γ的細(xì)胞頻數(shù)（%）對照組 12 40.95±17.9HBV 感染組 28 15.15±4.1統(tǒng)計(jì)量值 t=6.391P 值 P＜0.0001表 4 對照組與 HBV 感染組外周血 PBMC 中分泌 IFN-γ的KLRG1-NK 細(xì)胞頻數(shù)比較Table 4 Comparison of the frequency of KLRG1-NK cell secretingIFN-γ in peripheral blood PBMC of control group and HBVinfected groupA BC
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1 李鳴鴻;KLRG1受體在慢性乙型肝炎病毒感染中對NK細(xì)胞功能的影響[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2018年

本文編號：2838465