【摘要】：第一章:高致病性H7N9病毒的致病特征及生物特性研究背景:2017年,H7N9病毒發(fā)生變異,出現(xiàn)新型高致病性H7N9禽流感病毒感染病例。在廣東高致病H7N9病人中,存在持續(xù)的病毒血癥。為了進(jìn)一步明確高致病性H7N9病毒的致病特點(diǎn)及生物特性,我們開展了以下研究。研究方法:收集患者臨床資料,并采集高致病性H7N9病人的血漿和痰液進(jìn)行病毒分離。采用液相芯片技術(shù)檢測高致病性H7N9病人與正常人血漿的細(xì)胞因子水平。利用高致病性H7N9病毒和ZJU01毒株(2013年H7N9毒株)對小鼠進(jìn)行病毒感染造模,觀察兩個毒株的致病特征。在感染后2天,4天,6天分別處理小鼠,取血清和器官組織,進(jìn)行病毒檢測和分離。利用高致病性H7N9病毒和ZJU01毒株感染A549細(xì)胞模型,提取外泌體,對外泌體中流感病毒及其基因進(jìn)行檢測。研究結(jié)果:高致病性H7N9病人存在病毒血癥,血漿分離到活病毒。高致病H7N9病人同樣存在細(xì)胞因子風(fēng)暴,表現(xiàn)為 IL-1ra,IL-6,IP-10,IL-10,IFN-γ,MCP-3,IL-18,HGF,MCP-1異常高表達(dá)。動物實(shí)驗(yàn)中,高致病H7N9毒株的致病力明顯強(qiáng)于ZJU01毒株,并導(dǎo)致模型小鼠病死。對高致病H7N9模型小鼠的組織器官進(jìn)行病毒檢測,發(fā)現(xiàn)多個重要臟器尤其是腦組織中檢測和分離到高滴度的病毒。研究進(jìn)一步證實(shí),病毒感染的A549細(xì)胞分泌的外泌體含有病毒全基因組及具有感染性的病毒樣顆粒。研究結(jié)論:高致病性H7N9病人持續(xù)存在病毒血癥,誘導(dǎo)細(xì)胞因子風(fēng)暴和重要組織器官的損害。腦部感染可能是病人致死的主要原因之一。外泌體包裹可能是病毒入血并導(dǎo)致肺外組織感染的重要途徑之一。第二章:H7N9裂解佐劑(MF59)疫苗的長期穩(wěn)定性和免疫原性研究研究背景:2013年至2018年,H7N9禽流感病毒在中國人群中造成了顯著的發(fā)病率和病死率。H7N9疫苗對疾病預(yù)防至關(guān)重要。為驗(yàn)證MF59佐劑疫苗長期保存后是否保持穩(wěn)定,我們評估了該疫苗的穩(wěn)定性和免疫原性。研究方法:我們用疫苗株制備疫苗成品(抗原0.25 ml/劑量和MF59 0.25 ml/瓶)。在37±2℃環(huán)境中進(jìn)行熱穩(wěn)定性測試,在第3、7、14、28天對血凝素含量進(jìn)行檢測。在25±2℃環(huán)境中進(jìn)行加速穩(wěn)定性試驗(yàn),在第1、2、3個月進(jìn)行血凝素含量檢測。在5±3℃環(huán)境中進(jìn)行長期穩(wěn)定性測試,在第3、6、9、12、18、24、30個月進(jìn)行血凝素含量檢測。取保存6個月、24個月和30個月后的疫苗,對小鼠進(jìn)行免疫,評估該疫苗的免疫原性。以血凝抑制和微量中和滴度來評價抗體反應(yīng)。同時利用存放30個月的MF59佐劑疫苗進(jìn)行二次免疫后,對小鼠進(jìn)行攻毒,觀察MF59佐劑疫苗的免疫保護(hù)效應(yīng)。研究結(jié)果:H7N9裂解佐劑(MF59)疫苗,在37±2℃環(huán)境下可保存3天,在25±2℃可保存3個月,在5±3℃至少可保存30個月。各項(xiàng)指標(biāo)均達(dá)到藥典關(guān)于疫苗評價的標(biāo)準(zhǔn)。在保存30個月后,佐劑疫苗免疫后抗體血凝抑制效價和微量中和滴度沒有明顯的變化,免疫小鼠能夠有效抵御H7N9病毒的感染及其致病效應(yīng)。研究結(jié)論:我們的研究結(jié)果表明H7N9裂解(MF59)佐劑疫苗具有很好的穩(wěn)定性。在5±3℃至少可保存30個月,適合大流行疫苗儲備。第三章:A/ZJU01/PR8/2013裂解H7N9疫苗對高致病H7N9感染的小鼠的保護(hù)效應(yīng)研究研究背景:自從第一例H7N9以來,已經(jīng)有5波H7N9高峰,2017年出現(xiàn)新的高致病性H7N9毒株,為了評價A/ZJU01/PR8/2013疫苗是否還對高致病性H7N9毒株有保護(hù)效應(yīng),我們開展了此項(xiàng)研究。研究方法:用500μ1裂解疫苗(2.5μg HA和7.5μg HA兩個劑量)或者M(jìn)F59佐劑疫苗腹腔二針免疫小鼠,采集第二次免疫后14天血清,體外做血凝抑制實(shí)驗(yàn),用于評價免疫血清對高致病性H7N9毒株的抗體水平。同時,對免疫后小鼠進(jìn)行高致病性H7N9毒株攻毒,觀察1周,2周后小鼠的生長狀態(tài),后殺死小鼠取肺進(jìn)行病理及肺部病毒量檢測,同時檢測免疫效應(yīng)。研究結(jié)果:免疫血清能夠中和高致病性毒株,與ZJU01毒株比較,效價有所下降。動物實(shí)驗(yàn)表明,高致病性H7N9毒株對小鼠致病力明顯大于ZJU01毒株,但是疫苗仍然能有效保護(hù),MF59佐劑疫苗效果更好。研究結(jié)論:以ZJU01毒株為模板研發(fā)的H7N9裂解/佐劑疫苗,能有效地保護(hù)模型小鼠抵御高致病性H7N9的感染及其所致的病理效應(yīng)。MF59佐劑疫苗的保護(hù)效果更好。當(dāng)然,進(jìn)一步的臨床試驗(yàn)應(yīng)該開展,同時也應(yīng)該及時更新疫苗以發(fā)揮更好的效果。
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R511.7
【圖文】：

在顯微鏡下，ＨＥ染色片上可以發(fā)現(xiàn)肺泡組織破裂，肺損傷嚴(yán)重，肺內(nèi)大量炎性細(xì)逡逑胞浸潤。在同部位流感核心蛋白免疫組織化學(xué)染色發(fā)現(xiàn)肺內(nèi)尤其是細(xì)支氣管肺泡逡逑上皮內(nèi)可檢出大量的病毒抗原（圖１．２）。逡逑１９逡逑

細(xì)胞因子中，有９種細(xì)胞因子和趨化因子包括ＩＬ－ｌｒａ、ＩＬ－６．丨Ｐ－１０、ＩＬ－�。�、ＩＦＮ－ｙ、逡逑ＭＣＰ－３、ＩＬ－１８、ＨＧＦ、ＭＣＰ－１升高最為明顯。這些細(xì)胞因子是正常人血漿中細(xì)胞逡逑因子的３０多倍（圖１．３）。逡逑２０逡逑

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2 任元凱;倪正杰;顧小琳;張遠(yuǎn)鵬;董建成;王理;;一種知識化中國H7N9公共衛(wèi)生突發(fā)事件的方法[J];智慧健康;2017年01期

3 黃鵬;曲湘勇;;近期H7N9流感對衡陽家禽產(chǎn)業(yè)影響及對策[J];湖南畜牧獸醫(yī);2017年03期

4 李海斌;劉艷芹;劉影影;李盼;安珍;吳衛(wèi)東;;人感染H7N9禽流感的診治與防控措施[J];新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2017年09期

5 韓有恩;崔桓瑜;陳慶中;高寶德;;H7N9甲型流感研究進(jìn)展[J];甘肅畜牧獸醫(yī);2017年08期

6 李善琴;黃保英;齊香榮;任皎;趙莉;宋敬東;王文玲;譚文杰;阮力;田厚文;;H7N9流感假病毒制備條件的優(yōu)化及其在中和抗體檢測中的初步應(yīng)用[J];生物技術(shù)通訊;2016年03期

7 白愛竹;曾穎玲;王艷明;曾婉輝;;H7N9疫情時期發(fā)熱門診護(hù)理管理[J];黑龍江醫(yī)學(xué);2015年07期

8 許煥如;;12例人感染H7N9禽流感重癥患者的護(hù)理[J];家庭醫(yī)藥.就醫(yī)選藥;2016年09期

9 董志珍;鄭文杰;王乃福;趙祥平;吳冬雪;王玉玲;馬晶;賈潤清;王建華;張曉光;;H7N9禽流感病毒等溫擴(kuò)增快速檢測方法的建立[J];中國動物檢疫;2013年07期

10 張湘安;代茂;楊麗莎;;由H7N9引發(fā)的對人獸共患病的思考[J];湖南畜牧獸醫(yī);2013年04期

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1 董航;丁壯;;H7N9引發(fā)食品安全問題對中國肉雞產(chǎn)業(yè)的影響[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜傳染病學(xué)分會第八屆全國會員代表大會暨第十五次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2013年

2 潘艷艷;王志娟;馬紅麗;;H7N9禽流感期間臨時隔離病房的籌備[A];第四屆長三角地區(qū)創(chuàng)傷學(xué)術(shù)大會暨2014年浙江省創(chuàng)傷學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2014年

3 李長貴;徐康維;劉書珍;邵銘;袁力勇;徐苗;王軍志;;同亞型抗血清參考品在甲型H7N9流感病毒血凝素含量檢測中的適用性研究[A];2013年中國藥學(xué)大會暨第十三屆中國藥師周論文集[C];2013年

4 郭曉偉;;循證護(hù)理作用于1例人感染H7N9禽流感患者的效果觀察[A];2014第十屆全國中西醫(yī)結(jié)合災(zāi)害醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)大會江蘇省中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會災(zāi)害醫(yī)學(xué)、重癥醫(yī)學(xué)專業(yè)委員會成立大會暨健康產(chǎn)業(yè)成果展示洽談會學(xué)術(shù)論文集[C];2014年

5 盧受f;;H7N9流感的生態(tài)學(xué)分析及防控對策[A];第25屆廣東省科技進(jìn)步活動月畜牧獸醫(yī)學(xué)術(shù)與科技創(chuàng)新發(fā)展大會論文集[C];2016年

6 劉超宇;;屠呦呦獲獎引發(fā)中醫(yī)爭議的文本分析研究——基于與中醫(yī)防治H7N9事件的對比[A];安徽省第七屆新聞傳播學(xué)科研究生論壇論文集[C];2015年

7 施會強(qiáng);顧云飛;顧玉萍;俞亞波;;后H7N9流感時代京海黃雞產(chǎn)業(yè)化經(jīng)營的思考[A];第四屆（2014）中國黃羽肉雞行業(yè)發(fā)展大會會刊[C];2014年

8 王國政;崔大偉;周華君;金美彤;戴玉柱;成軍;;標(biāo)本類型對甲型禽流感H7N9病毒實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果的影響[A];2015浙江省檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2015年

9 Xiliang Wang;Penghui Yang;Yueqiang Duan;Hongjing Gu;Rui Chen;Zhongpeng Zhao;Liangyan Zhang;Li Xing;Chengcai Lai;;Response to a monovalent influenza A(H7N9) vaccine[A];第九屆全國免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會論文集[C];2014年

10 徐小燕;許金美;殳儆;王黎梅;;高致病性人禽流感(H7N9)疑似與確診患者的護(hù)理[A];中華醫(yī)學(xué)會第一屆重癥心臟全國學(xué)術(shù)大會暨第二屆西湖重癥醫(yī)學(xué)論壇、2013年浙江省重癥醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2013年

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1 記者 董偉;衛(wèi)計委：尚未發(fā)現(xiàn)H7N9人傳人證據(jù)[N];中國青年報;2013年

2 記者 郭習(xí)松;H7N9可防可控，沒必要談禽色變[N];湖北日報;2017年

3 健康時報記者 徐瑤 實(shí)習(xí)記者 曹敏;H7N9來襲，別怕!這些疫苗在路上了[N];健康時報;2017年

4 通訊員 劉振 吳蕾;首例重癥人感染H7N9禽流感患者[N];大眾衛(wèi)生報;2017年

5 本報記者 肖玫麗;H7N9變異株出現(xiàn)耐藥性 鐘南山：尚不能得出任何結(jié)論[N];21世紀(jì)經(jīng)濟(jì)報道;2017年

6 記者 鄭可歡;廣東率先啟動H7N9免疫試點(diǎn)工作[N];農(nóng)民日報;2017年

7 記者 楊金偉;5月H7N9禽流感死亡37人[N];健康報;2017年

8 記者 陳青;滬研究人員發(fā)現(xiàn)人體用H7N9抗體[N];文匯報;2017年

9 記者 張建列 通訊員 石睿;“防治H7N9亞型禽流感科技攻關(guān)”項(xiàng)目通過驗(yàn)收[N];廣東科技報;2017年

10 記者 周凱;上海新增1例人感染H7N9禽流感病例[N];中國青年報;2013年

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1 吳曉鑫;高致病性H7N9的致病特征及疫苗對病毒的免疫效應(yīng)研究[D];浙江大學(xué);2019年

2 劉晶晶;重組嵌合新城疫病毒載體的構(gòu)建及其在H7N9和H9N2亞型禽流感疫苗研制中的應(yīng)用[D];揚(yáng)州大學(xué);2018年

3 俞亮;甲型H7N9禽流感重癥患者臨床、病毒學(xué)、組織病理學(xué)研究[D];浙江大學(xué);2014年

4 張旋;膿毒癥在H7N9禽流感以及侵襲性肺曲霉菌病中的臨床研究[D];浙江大學(xué);2018年

5 趙永坤;H7N9亞型流感病毒樣顆粒免疫原制備與精制免疫球蛋白研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2017年

6 楊美芳;H7N9禽流感重癥化預(yù)警臨床研究[D];浙江大學(xué);2015年

7 孔暉暉;H7N9亞型流感病毒遺傳演化分析及H7N9弱毒疫苗在哺乳動物模型上的免疫效力評價[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2016年

8 王鐵成;H7N9亞型流感病原生態(tài)學(xué)調(diào)查與流感病毒通用型人源化抗體的初步探索[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2014年

9 鮑琳琳;小鼠模型評價球蟲佐劑對H7N9禽流感病毒滅活疫苗的增效作用[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

10 朱聞斐;H7N9禽流感病毒致病與傳播機(jī)制研究[D];中國疾病預(yù)防控制中心;2015年

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1 李繼清;兩株不同H7N9病毒抗宿主天然免疫比較研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2019年

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4 馬旺;江蘇省人感染H7N9禽流感臨床和流行病學(xué)特征及疾病負(fù)擔(dān)研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2018年

5 夏云;H7N9疫情對家禽產(chǎn)業(yè)的影響[D];華南農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

6 李善琴;基于假病毒的H7N9流感病毒中和抗體檢測方法的建立與初步應(yīng)用[D];中國疾病預(yù)防控制中心;2016年

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9 郭金磊;重組人甘露糖結(jié)合凝集素與人感染H7N9亞型流感病毒相互作用研究[D];中國疾病預(yù)防控制中心;2015年

10 黃生波;玉竹多糖對H7N9流感病毒裂解疫苗粘膜免疫的佐劑效力研究[D];湖南師范大學(xué);2016年

本文編號：2741820