本文關(guān)鍵詞：液相芯片技術(shù)檢測耐多藥結(jié)核分枝桿菌方法研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：結(jié)核分枝桿菌耐藥性的檢測在預防和治療結(jié)核病過程中具有十分重要的意義。從我國國情出發(fā),需要建立一種快速有效、成本低廉的耐多藥結(jié)核分枝桿菌檢測方法。本文設計了含有耐藥突變基因的質(zhì)粒,模擬耐藥結(jié)核桿菌的不同基因突變類型,將液相芯片技術(shù)與等位基因特異性引物延伸反應相結(jié)合,對耐多藥結(jié)核分枝桿菌的檢測方法進行研究。確定了方法的最佳反應體系,可以同時對多個突變基因進行檢測,各基因位點之間不存在信號干擾,最低檢測濃度可達1ng/mL;重復性實驗表明,對不同基因突變形式檢測的變異系數(shù)(CV)為6.72%-12.77%。本研究建立的耐多藥結(jié)核桿菌的檢測方法具有靈敏度高、特異性強、重復性好、檢測速度快、價格低廉、高通量等特點,極具臨床應用潛力。
【關(guān)鍵詞】：液相芯片技術(shù) 等位基因特異性引物延伸反應 結(jié)核分枝桿菌 耐多藥性
【學位授予單位】：長春理工大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R52
【目錄】：

• 摘要3-4
• ABSTRACT4-7
• 第一章 緒論7-18
• 1.1 結(jié)核病簡介7-10
• 1.1.1 結(jié)核病的產(chǎn)生7
• 1.1.2 結(jié)核病的基本現(xiàn)狀7-8
• 1.1.3 耐藥結(jié)核病的分類8
• 1.1.4 結(jié)核病的主治藥物8-9
• 1.1.5 結(jié)核桿菌的耐藥機理9-10
• 1.2 檢測結(jié)核病耐藥性的常用方法10-14
• 1.2.1 藥物敏感性試驗法10-11
• 1.2.2 直接測序法11
• 1.2.3 聚合酶鏈式反應-單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析(PCR-SSCP)11-12
• 1.2.4 PCR-線性探針雜交技術(shù)12-13
• 1.2.5 固相芯片法13-14
• 1.3 Luminex液相芯片技術(shù)14-16
• 1.3.1 Luminex液相芯片技術(shù)原理14-15
• 1.3.2 Luminex xTAG技術(shù)15-16
• 1.3.3 液相芯片技術(shù)的優(yōu)勢及其應用16
• 1.4 本研究實驗設計16-18
• 1.4.1 研究目的和意義16-17
• 1.4.2 實驗設計17-18
• 第二章 液相芯片技術(shù)檢測耐多藥結(jié)核分枝桿菌方法建立18-36
• 2.1 實驗材料18-19
• 2.1.1 材料18
• 2.1.2 主要儀器18
• 2.1.3 主要試劑18
• 2.1.4 實驗溶液的配制18-19
• 2.2 方法19-27
• 2.2.1 檢測序列信息19-20
• 2.2.2 感受態(tài)細胞的制備20-21
• 2.2.3 含有檢測模板的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化21
• 2.2.4 質(zhì)粒的提取21-22
• 2.2.5 PCR擴增反應22-23
• 2.2.6 PCR產(chǎn)物純化23
• 2.2.7 ASPE反應23-24
• 2.2.8 熒光微球雜交24-25
• 2.2.9 Luminex 200儀器校正25-26
• 2.2.10 樣品檢測26-27
• 2.2.11 反應條件優(yōu)化27
• 2.3 實驗結(jié)果27-33
• 2.3.0 質(zhì)粒含量檢測結(jié)果27-28
• 2.3.1 PCR擴增及反應體系優(yōu)化結(jié)果28-29
• 2.3.2 PCR擴增產(chǎn)物純化結(jié)果29
• 2.3.3 Tsp DNA聚合酶濃度優(yōu)化結(jié)果29-30
• 2.3.4 熒光微球濃度優(yōu)化結(jié)果30-31
• 2.3.5 鏈霉親和素藻紅蛋白濃度優(yōu)化結(jié)果31-32
• 2.3.6 鏈霉親和素藻紅蛋白雜交時間優(yōu)化結(jié)果32-33
• 2.3.7 8種重組質(zhì)粒的檢測結(jié)果33
• 2.4 討論33-35
• 2.5 小結(jié)35-36
• 第三章 液相芯片技術(shù)檢測耐多藥結(jié)核分枝桿菌可靠性研究36-44
• 3.1 實驗材料36-37
• 3.1.1 材料36
• 3.1.2 主要儀器36
• 3.1.3 主要試劑36
• 3.1.4 實驗溶液的配制36-37
• 3.2 方法37-38
• 3.2.1 靈敏度實驗37
• 3.2.2 重復性實驗37-38
• 3.3 結(jié)果38-42
• 3.3.1 靈敏度檢測38-39
• 3.3.2 重復性檢測39-42
• 3.4 討論42-43
• 3.5 小結(jié)43-44
• 結(jié)論44-45
• 致謝45-46
• 參考文獻46-48

  本文關(guān)鍵詞：液相芯片技術(shù)檢測耐多藥結(jié)核分枝桿菌方法研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：261748